猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪流行性腹泻病（porcine epidemic diarrhea,PED）是以猪腹泻、脱水和呕吐为特征的一种急性、传播迅速的病毒性传染病,对仔猪致死率高达100%。PED的发生具有明显的季节性,多在冬春两季暴发,但是具体发病原因尚未明确。本研究以热休克蛋白70为靶标,探索寒冷刺激对PED季节性发生的影响,为其发病机制的研究提供理论基础。为明确冷暴露对Hsp70的影响,本研究首先将仔猪置于4℃以及Vero E6细胞置于4℃、25℃环境下分别冷暴露6 h和12 h,通过q PCR和Western blot检测Hsp70 mRNA与蛋白水平变化。其次,为明确Hsp70对PEDV复制的影响及具体作用阶段,将PEDV分别感染过表达、沉默Hsp70的Vero E6细胞,进一步将Hsp70抑制剂分别加入PEDV感染的黏附、内化以及增殖阶段,检测PEDV mRNA和蛋白水平变化。最后,为探索Hsp70调控PEDV的分子机制,在过表达Hsp70和加入Hsp70抑制剂的IPEC-J2细胞中进行poly I:C刺激,以及过表达Hsp70后感染PEDV,检测干扰素（IFN-β和IFN-λ）水平变化。结果显示,冷暴露6 h后,仔猪的十二指肠、空肠和回肠中Hsp70的mRNA水平显著高于对照组（p<0.01）,蛋白水平与对照组相比无显著变化（p>0.05）,冷暴露12 h后,仔猪的十二指肠、空肠和回肠中Hsp70的mRNA和蛋白水平均显著高于对照组（p<0.05）;Vero E6细胞在25℃环境下冷暴露6 h和12 h后,Hsp70的mRNA水平均显著高于对照组（p<0.05）,蛋白水平与对照组相比无显著变化（p>0.05）,在4℃环境下冷暴露6 h后,Hsp70的mRNA水平显著高于对照组（p<0.001）,冷暴露12 h后,Hsp70的mRNA和蛋白水平均显著高于对照组（p<0.01）。进一步结果显示,在Vero E6细胞过表达Hsp70后,显著提高PEDV的mRNA和蛋白水平（p<0.01）;抑制Hsp70的表达后,显著降低PEDV的mRNA和蛋白水平（p<0.01）。在不同感染阶段加入Hsp70抑制剂显示,Hsp70在PEDV内化和复制阶段促进病毒增殖。在过表达Hsp70的IPEC-J2细胞中经poly I:C刺激,IFN-λ的mRNA水平显著低于对照组（p<0.05）,加入Hsp70抑制剂处理后经poly I:C刺激,IFN-λ与IFN-β的mRNA水平显著高于对照组（p<0.0001）;过表达Hsp70后感染PEDV,IFN-λ与IFN-β的mRNA水平显著低于对照组（p<0.01）。综上所述,冷暴露能引起仔猪肠组织和Vero E6细胞中Hsp70表达水平升高,Hsp70表达升高降低了IPEC-J2细胞中IFN-λ与IFN-β表达水平,增强了PEDV的复制。