【摘 要】
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该论文利用来源于CREST综合症患者的ACA血清来筛选拟南芥cDNA文库,得到一个阳性克隆CP4.序列分析结果表明CP4与已报导的多种CDPK基因同源性达60%.在其N-端发现有4个激酶特征
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该论文利用来源于CREST综合症患者的ACA血清来筛选拟南芥cDNA文库,得到一个阳性克隆CP4.序列分析结果表明CP4与已报导的多种CDPK基因同源性达60%.在其N-端发现有4个激酶特征保宁序列,但C-端未见明显的EF-手型结构,据此,认为CP4是一种新的CDPK,根据Satterlee的分类方法,应属Ⅶ亚类.Southern杂交结果显示该基因正在拟南芥基因组中至少存在两种等位形式.研究小组将CP4基因中一段长为759bp的序列构建到原核表达载体pET-5C上,在E.coli中高效表达了约为27KD的肽段,并将纯化的肽段做为抗原免疫兔子制备抗体,用于免疫组织化学分析,结果表明CP4蛋白定位于拟南芥的根、叶、果实中.利用DIG标记的CP4探针进行的原位杂交结果显示:CP4 mRNA在拟南芥的花和根中高表达,表明CP4在成熟的组织中具有一定的功能,但在转录后的翻译过程中具有一定的延迟效应.
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