【摘 要】
：
小RNA作为RNA沉默的核心组成部分,在真核生物的许多生物过程中发挥着多种多样的重要作用。小RNA水平的异常降低或升高与许多发育和生理缺陷有关。小RNA的体内水平是通过调节其生物发生和周转的速度精确调控的,3’端核糖上的2’-O-甲基化是提高小RNA稳定性的主要机制。最近,新出现的证据表明,几乎任何类型的细胞小RNA的3’端都有2’-O-甲基化修饰,包括植物中的miRNA和siRNA,动物和人类中
论文部分内容阅读
小RNA作为RNA沉默的核心组成部分,在真核生物的许多生物过程中发挥着多种多样的重要作用。小RNA水平的异常降低或升高与许多发育和生理缺陷有关。小RNA的体内水平是通过调节其生物发生和周转的速度精确调控的,3’端核糖上的2’-O-甲基化是提高小RNA稳定性的主要机制。最近,新出现的证据表明,几乎任何类型的细胞小RNA的3’端都有2’-O-甲基化修饰,包括植物中的miRNA和siRNA,动物和人类中的miRNA、piRNAs和tsRNAs。单个小RNA的甲基化修饰可以通过液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）来确定。然而,LC-MS/MS分析需要高纯度的单个小RNA。由于从组织或细胞中纯化特异性小RNA的困难性,LC-MS/MS在表征小RNA甲基化方面的研究进展有限。在这里,我们报道了一种从人体组织中有效纯化小RNA用于LC-MS/MS甲基化分析的新方法。该方法包括两个步骤:1)RNA pulldown实验,将从人体组织中提取的总小RNA与目标小RNA的生物素化反义寡核苷酸孵育,该寡核苷酸与目标小RNA反义,但其5′末端含有额外的两个A残基,以确保其分子量比靶向小RNA大得多。然后通过链霉亲和素磁珠捕捉生物素化反义寡核苷酸-小RNA结合复合物,再用水将目标小RNA洗脱下来,通过RNA pulldown实验,得到的目标小RNA纯度可以达到约70%;2)使用核酸外切酶I处理纯化的小RNA,以降解可能与目标小RNA一起洗脱下来的DNA寡核苷酸,之后加入与目标小RNA序列互补的单链DNA,形成DNA/RNA杂交双链,从而在后续酶消化过程中保护目标小RNA,之后依次用核酸酶S1和DNA酶I进行消化。利用4对合成的甲基化和非甲基化小RNA的混合物,我们通过优化核酸酶S1处理条件进一步完善了这种两步法,其分离出的目标小RNA的纯度可到99%。利用这种方法,我们成功地从人正常肺和精子组织样品中纯化了miR-21-5p、miR-26-5p、piR-020485和tsRNA,并通过LC-MS/MS分析了其3’端2’-O甲基化修饰。
其他文献
目前随着转基因玉米的广泛种植,其对土壤生态的安全性开始受到人们的关注。外源基因或其编码的蛋白通过转基因玉米的枯枝落叶或者根系分泌物等方式进入土壤,可能会对土壤微生物,尤其是根际土壤微生物产生影响。本研究选择种植在吉林省公主岭市实验基地的转mcry1Ab和mcry2Ab双基因抗虫玉米株系2A-7以及对照品种B73,来分析转基因玉米的种植对根际土壤微生物可能产生的影响。对转基因玉米2A-7进行的研究得
肝纤维化（hepatic fibrosis）是多种慢性肝疾病常见并发症之一,随着肝损伤的持续加剧,肝纤维化可以朝着肝硬化、门静脉高压、肝癌和肝衰竭等的方向发展。肝纤维化最显著的病理特征是富含胶原纤维的细胞外基质在肝内过度沉积。肝星状细胞的激活过程被认为是肝内细胞外基质分泌的主要途径之一,这一过程的具体分子机制在肝纤维化的研究中受到广泛关注。肝星状细胞激活的过程较为复杂,存在氧化应激、表观遗传学信号
肾癌是最常见的十种恶性肿瘤之一[1],最常见的亚型是肾透明细胞癌（clear cell Renal cell carcinoma,cc RCC）,肾透明细胞癌的死亡率约占所有恶性肿瘤死亡率的2%,并呈现男性肾癌发病率约是女性的2倍,并且大部分患者发现时的年龄段一般是60-70岁之间的特点[2]。肾癌极易发生转移,而且由于其无症状特征,通常发现时转移已经存在,且肾切除术后复发很常见。目前临床上肾癌的
近年来,越来越多的研究表明,小胶质细胞所介导的炎症反应,参与了包括抑郁症、自闭症等精神疾病,以及阿尔茨海默症、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病在内的各类疾病的发病过程,甚至扮演着关键角色。因此,对脑部炎症的及时检测对于预防和治疗各类疾病有着重要意义。目前大多数炎症检测手段只有当脑组织处于严重病理状态才能检测,同时检测试剂制备困难,制备成本高。因此,一种快速准确检测小胶质细胞活化引起的脑部
氨基酸在生物体内具有重要生理研究价值,自然界中大多数氨基酸是L型,D型氨基酸分子含量少价值高,在治疗某些疾病和衰老机制方面,以及在医药、农药和食品领域都具有重要作用。D-谷氨酰胺是一种药用氨基酸,用于治疗胃和十二指肠溃疡以及幼儿智力低下等症,也是治疗白血病药物的中间体。二肽是由两个氨基酸通过脱水缩合形成酰胺键相连的特殊分子,二肽相较于单一的氨基酸,具有其特殊的优势,如降血压,镇痛,抗肿瘤,抑制白血
乳腺癌是全球女性面临的最大的疾病威胁,其发病率和死亡率居高不下,已经成为造成女性死亡的首要因素。2020年最新发布的全球癌症负担统计数据结果中显示,乳腺癌的新增人数已经超过肺癌成为全球第一大癌症。目前,尽管乳腺癌的全身治疗已取得很大进展,拥有较为成熟的治疗体系,但由于肿瘤自身具有多分子分型异质性特点,以及化疗耐药性等困扰,使得乳腺癌的治疗依旧有很多问题亟待解决。因此,全新化合物的发现和研究可以给乳
衰老受基因、环境、营养等多种因素的影响,其主要特征是机体在细胞和整体水平的渐进性功能的衰退。线粒体功能与衰老之间存在着复杂的联系。由于线粒体的毒性兴奋作用,低水平的应激反应往往会引起线粒体轻度功能障碍,引发适应性反应来增强应激抵抗甚至延长寿命。此外,进化上保守的环境线索越来越被深入研究,被证明能够介导生物体的生理机能和寿命。叶绿素代谢物焦脱镁叶绿素a（Pyropheophorbide-a,Pa）是
小胶质细胞1919年由西班牙神经生物学P?′odel R?′o Hortega首次发现,是中枢神经系统（CNS,Central Nervous System）的“第三元素”。小胶质细胞作为CNS的“介质”胶质细胞的一种和脑实质内唯一的免疫细胞,其在CNS的发育,内环境稳态维持和神经系统疾病过程中都扮演着重要的角色。在大脑发育的过程中,小胶质细胞通过其强大吞噬作用“建造”大脑:清除多余死亡的神经元;
物种分化是物种多样性形成的重要基础。种间互作是影响物种分化的重要生物学因素。前期研究主要集中在单个营养级内或相邻营养级间的物种互作和物种分化。但是,就植物-植食性昆虫-寄生蜂这三个营养级而言,由于植物能直接影响寄生蜂的适合度,植物可能通过跨营养级物种互作介导寄生蜂的物种分化。在川西北红原县,两种寄生蜂分别以寄生菊科植物钝苞雪莲（Saussurea nigrescens）和淡黄香青（Anaphali
抑郁症是常见的外科手术并发症之一，但传统抗抑郁药物疗效有限，起效速度缓慢。氯胺酮对抑郁症患者具有快速显著的疗效，为氯胺酮治疗围术期抑郁的可行性提供可靠的临床依据。本文回顾氯胺酮抗抑郁机制以及国内外关于氯胺酮治疗围术期抑郁的研究，并探讨其亚麻醉剂量的安全性和耐受性。同时提出其异构体艾司氯胺酮的临床前景。