铝致大鼠淋巴细胞凋亡的cAMP/PKA信号传导机制

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:yliudl
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本实验以体外培养的SD大鼠脾脏淋巴细胞为研究对象,在培养液中分别加入终浓度为0mmol/L(对照组,CG)、0.27mmol/L(低剂量组,LG)、0.54mmol/L(中剂量组,MG)和1.08mmol/L(高剂量组,HG)的三氯化铝(AlC13·6H20)。采用吖啶橙/溴乙啶双荧光染色(AO/EB)法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡相对数量;ELISA法检测胞内环腺苷酸环化酶(cAMP)含量;实时荧光定量PCR法检测淋巴细胞内蛋白激酶A(PKA)、NF-κB和survivin mRNA表达水平;Western blot检测淋巴细胞核内NF-κB蛋白表达水平;反转录PCR法检测淋巴细胞内Bcl-2/Bax mRNA表达比率。旨在探讨铝致淋巴细胞凋亡的cAMP/PKA信号传导机制,结果表明:1)染铝组脾脏淋巴细胞凋亡、坏死程度均显著高于对照组,呈剂量-效应关系。染铝组脾脏淋巴细胞早期凋亡指数与晚期凋亡指数均显著高于对照组,表明铝可诱导大鼠脾脏淋巴细胞凋亡。2)染铝组脾脏淋巴细胞内cAMP含量、PKA mRNA表达量均显著高于对照组,淋巴细胞内NF-κB (P65) mRNA表达量及淋巴细胞细胞核内蛋白表达量均显著低于CG,说明铝能激活大鼠脾脏淋巴细胞cAMP/PKA信号传导通路,且激活的cAMP/PKA信号传导通路可抑制NF-κB活性。3)染铝组脾脏淋巴细胞内Bcl-2/Bax及survivin mRNA表达水平显著低于对照组,说明被抑制的NF-κB通过下调其凋亡靶基因Bcl-2/Bax及survivin mRNA表达水平诱导染铝大鼠脾脏淋巴细胞凋亡。上述结果说明,铝可激活cAMP/PKA信号传导通路,激活的cAMP/PKA信号通路通过抑制NF-κB活性下调其凋亡靶基因Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax的转录,诱导染铝大鼠淋巴细胞凋亡。
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