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裂谷热病毒（Rift Valley Fever Virus,RVFV）属于布尼亚病毒科（Bunyaviridae）白蛉热病毒属（Phlebovirus）,主要经蚊媒传播,可引起发热性人兽共患病裂谷热（Rift Valley Fever,RVF）,导致反刍动物的大量死亡及人类的致命性出血热。RVF最初仅流行于非洲东部地区,伴随进出口贸易的增加,现已在全球范围逐步扩大,我国于2016年确诊首例输入性病例。目前,用于预防RVFV的疫苗仅部分减毒疫苗,价格昂贵且仅诱导短期免疫,没有针对其感染的特定治疗药物。RVFV囊膜蛋白（G）在翻译后修饰过程中裂解为Gn蛋白和Gc蛋白。其中,Gn蛋白可诱导宿主产生中和抗体,因而作为研究RVF基因工程疫苗的重要靶点。本研究选取Gn蛋白主要抗原区Gn1,通过制备RVFV Gn1蛋白单克隆抗体以及使用杆状病毒表达系统构建表达Gn1蛋白的重组杆状病毒,以期为RVF新型疫苗研发及诊断试剂的研发提供重要材料。具体研究内容如下:1.RVFV Gn1蛋白单克隆抗体的制备将选取的Gn1片段进行合成,作为cDNA模板,通过PCR扩增其基因序列。然后将目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,构建原核表达质粒pET-28a-RVFV-Gn1。在37℃,经1.0 mM/L浓度的IPTG诱导、包涵体纯化,获得RVFV Gn1蛋白。用纯化的RVFV Gn1蛋白免疫4周龄BALB/c小鼠,经细胞融合、ELISA检测及三次亚克隆筛选,获得2株能够稳定分泌RVFV Gn1单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为:6D3和11B8。通过间接免疫荧光IFA和Western Blot验证,两株抗体均能与RVFV Gn1真核蛋白和原核蛋白反应,抗体效价分别为1:819200,1:1638400。分析两株单克隆抗体的亚型发现其重链为IgG2b,轻链为Kappa。2.构建表达RVFV Gn1蛋白的重组杆状病毒将RVFV Gn1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1/HTB中,构建杆状病毒重组质粒。将带信号肽的重组质粒pFastBac1/HTB-RVFV-F-Gn1和不带信号肽的重组质粒pFastBac1/HTB-RVFV-Gn1分别转化至DH10Bac感受态中,进行蓝白斑筛选及PCR验证,获得穿梭质粒rBacmid-RVFV-F-Gn和rBacmid-RVFV-Gn1;穿梭质粒转染至sf9（Spodoptera Frugiperda）细胞中,经IFA验证,获得能够表达RVFV Gn1蛋白的重组杆状病毒;用病毒感染High5细胞,表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,获得纯度较高的RVFV Gn1蛋白。经SDS-PAGE和Western Blot检测,RVFV Gn1蛋白在细胞裂解上清中获得高效表达。本研究针对裂谷热病毒Gn蛋白的主要抗原区Gn1,使用原核表达系统获得其重组原核蛋白,并通过免疫、融合和亚克隆筛选获得2株单克隆抗体6D3、11B8。使用杆状病毒表达系统,成功构建了RVFV Gn1蛋白的重组杆状病毒,并获得在细胞破碎上清中高效表达的重组真核蛋白。