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目的和意义:肿瘤是仅次于心血管疾病而威胁人类健康的主要杀手,其发生率呈逐年上升的趋势。进入二十一世纪以来,肿瘤研究学者们一直在努力思考治疗肿瘤的新思维、新途径和新方法。利用传统抑癌中药来治疗肿瘤,已成为当今肿瘤学者们研究的重要方向之一。传统中药是祖国的瑰宝,我国的药用植物资源丰富,其中有许多具有抑癌特性的中药,其抗肿瘤活性已得到肿瘤研究学者们的重视。本研究将豆蔻提取物作用于体外培养的人胃腺癌SGC-7901细胞株,观察不同浓度的豆蔻提取物、不同的作用时间对细胞增殖的影响,了解细胞抑制率的变化。同时观察不同浓度的豆蔻提取物、不同的作用时间诱导细胞的凋亡,并对细胞凋亡的形态学变化进行了观察,对细胞的bcl-2蛋白表达进行了检测。拟通过豆蔻提取物诱导细胞凋亡方面的实验研究,为进一步研究豆蔻提取物抗肿瘤的应用、探讨其抗肿瘤的机制研究奠定基础。方法:取对数生长期的SGC-7901细胞,胰蛋白酶消化后,以6×103/ml接种于96孔培养板,细胞贴壁后加入豆蔻提取物使之成为不同的工作浓度(0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml),同时设立试剂对照组和肿瘤细胞对照组,置5%CO2培养箱内分别培养24、48、72小时后,酶标仪检测A570nm的OD值,计算不同浓度的豆蔻提取物、不同的作用时间对SGC-7901细胞增殖的影响。将不同工作浓度的豆蔻提取物(0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml)作用于体外培养的SGC-7901细胞24小时、48小时后,胰蛋白酶消化,PBS离心洗涤收集,稀释至106/ml,以PBS重悬细胞,与适当比例的吖啶橙/溴化乙啶荧光染液混合,在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态并分别计数早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、非凋亡的坏死细胞、活细胞,同时统计细胞的凋亡率。将不同工作浓度的豆蔻提取物(0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml)作用于体外培养的SGC-7901细胞24小时、48小时后,胰蛋白酶消化,调整待侧细胞的密度为5×105-1×106个/ml,PBS洗涤,将细胞重悬于200ul结合缓冲液,加入适当比例的Annexin-Ⅴ-FITC和PI,混匀室温反应15min后流式细胞仪检测早期凋亡细胞率。将不同工作浓度的豆蔻提取物(0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml)作用于体外培养的SGC-7901细胞48小时后,胰蛋白酶消化,收集细胞,制成细胞蜡块,切片后进行SP染色,在图像分析系统下观察并分析bcl-2蛋白表达情况。结果:1、MTT法检测豆蔻提取物抑抑制SGC-7901增殖的实验结果显示:作用24小时后0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml组的细胞抑制率(%)分别为18.03±2.39、25.18±1.53、30.99±1.96、40.40±1.94;作用48小时后0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml组的细胞抑制率(%)分别为23.76±1.58、32.37±1.75、41.53±1.97、58.78±1.97;作用72小时后0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml组的细胞抑制率(%)分别为29.93±1.79、41.32±1.97、49.24±1.57、64.65±1.33。实验组与对照组相比,统计学差异有显著性( P<0.05)。2、通过AO-EB染色法在荧光显微镜下观察豆蔻提取物作用于SGC-7901细胞,结果表明:作用24小时后对照组及0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml各组的细胞凋亡率(%)分别为2.50±0.50、11.33±1.04、18.50±1.32、24.00±0.50、33.83±2.08;作用48小时后对照组、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml的凋亡细胞率(%)分别为4.67±1.04、19.00±1.73、26.83±2.02、33.50±2.29、41.67±0.29。加药组与对照组相比,统计学差异有显著性( P<0.05)。3、流式细胞仪Annexin-Ⅴ-FITC法检测不同浓度的豆蔻提取物作用于SGC-7901细胞,结果表明:作用24小时后对照组及0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml各组的早期凋亡细胞率(%)分别为1.43±0.15、9.87±0.21、16.43±0.85、20.80±1.90、26.77±0.35;作用48小时后对照组及0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml各组的早期凋亡细胞率(%)分别为2.07±0.25、16.13±1.07、20.47±0.87、23.83±0.91、35.37±1.36。实验组与对照组相比,统计学差异有显著性( P<0.05)。用细胞免疫组化的方法法检测不同浓度的豆蔻提取物作用于SGC-7901细胞48后的bcl-2蛋白表达情况,结果表明:对照组、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml组的平均光密度分别为0.419±0.016、0.374±0.010、0.286±0.011、0.183±0.014。组间比较,统计学差异有显著性(P<0.05)。结论:1、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml豆蔻提取物体外可以抑制SGC-7901细胞的增殖;2、0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.0mg/ml豆蔻提取物体外可以诱导SGC-7901细胞的凋亡;3、一定浓度范围内的豆蔻提取物诱导SGC-7901细胞凋亡可能与下调bcl-2蛋白的表达有关;