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近年来，我国乳品行业发展迅速，但产品结构单一、附加值低。牛乳中酪蛋白含量丰富，开发和利用酪蛋白可以提高牛乳的经济价值。酪蛋白源抗菌肽安全性高，但酶解分离纯化步骤繁琐限制了其发展，所以建立高效、快速的抗菌肽分离纯化方法是实现其工业化生产亟待解决的问题。本论文通过蛋白酶水解酪蛋白，建立一种固相亲和萃取联合HPLC指纹图谱的细胞膜色谱法（CMC），快速、准确地从酶解液中筛选出抗菌肽，并研究其抑菌特性及稳定性，初步探讨了该抗菌肽对金黄色葡萄球菌生长曲线及菌体细胞壁膜组分的影响，为开发利用酪蛋白和制备抗菌肽提供理论依据。首先以酪蛋白为原料，分别用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和复合蛋白酶水解酪蛋白，以酶解产物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为指标筛选胃蛋白酶作为水解酶，并对酶解条件进行优化，确定制备抗菌肽的条件为酪蛋白浓度10mg/mL，酶底比（E/S）1:15，pH2.0，温度37℃，水解时间3h。其次，利用反复冻融、超声辅助破壁技术破碎啤酒酵母菌细胞，并结合密度梯度离心技术制备细胞膜,以硅胶为载体采用涂覆法制备酵母菌细胞膜固定相，并通过电镜扫描对其进行表征。研究结果表明：啤酒酵母菌先经反复冻融处理（加水量为25%、冻融4次），然后经过超声处理（超声功率400W，每次超声时间10s，超声总时间15min，酵母菌浓度20mg/mL），破壁率达到了89.31%，且破壁率是反复冻融单独作用的2.4倍，是超声波单独作用的1.5倍。电镜显示，细胞膜固定相SCMSP与纯硅胶载体相比，表面已被细胞膜包裹而变得粗糙。硅胶表面对细胞膜的饱和吸收值Csmax为2.38mg/g、吸收常数K*为325.61mL/mg。再次，建立CMC从酪蛋白酶解液中成功筛选出抗菌肽，利用MALDI-TOF-MS/MS技术鉴定抗菌肽的氨基酸序列为Leu-Arg-Leu-Lys-Lys-Tyr-Lys-Val-Pro-Gln-Leu。抑菌活性表明，利用CMC分离酪蛋白源抗菌肽是可行的，所得抗菌肽对革兰氏阳性菌、阴性菌表现出抑菌活性，且具有一定的热稳定性、能够抵抗一定的离子强度变化，室温条件储藏稳定性较好。最后，利用光密度法实现在活菌条件下测定酪蛋白源抗菌肽对金黄色葡萄球菌的生长曲线、菌体内膜等组分的影响，并利用红外光谱技术研究其对菌体结构的影响。结果表明：酪蛋白源抗菌肽可以破坏菌体壁膜结构，导致菌体死亡。