【摘 要】
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目的磁酶免化学发光法在临床检验中应用广泛,具有灵敏度高、定量精准及易于自动化等特点,但是其往往依赖于高集成化大型自动检测设备,仪器多为进口、价格昂贵、吸液移液等系统维护成本高、不便运输,在基层医院以及偏远地区普及困难。因此,发展精简的小型磁酶免化学发光检测仪器,将有助于将磁酶免化学发光技术在基层医疗机构推广。作者所在的课题组前期发明了一种以磁棒转移为基础的磁酶免检测体系,该体系利用磁棒转移自动化设
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目的磁酶免化学发光法在临床检验中应用广泛,具有灵敏度高、定量精准及易于自动化等特点,但是其往往依赖于高集成化大型自动检测设备,仪器多为进口、价格昂贵、吸液移液等系统维护成本高、不便运输,在基层医院以及偏远地区普及困难。因此,发展精简的小型磁酶免化学发光检测仪器,将有助于将磁酶免化学发光技术在基层医疗机构推广。作者所在的课题组前期发明了一种以磁棒转移为基础的磁酶免检测体系,该体系利用磁棒转移自动化设备进行免疫磁珠的分离与转移,可代替大型设备吸液、移液的分离方式,省去液路系统,从而减小检测仪器体积,降低制造成本;本研究意图利用单纯疱疹病毒磁酶免检测试剂对该设备进行优化实验和临床评估。方法1.建立磁棒转移磁酶免检测技术,并对仪器参数及试剂进行优化,包括磁棒震荡的频率、洗涤液的体积、洗涤时间、免疫磁珠浓度、鼠抗人免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,Ig G）抗体浓度的优化、碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP）标记的羊抗鼠抗体浓度的优化等。2.对检测系统的性能进行评估,包括标准曲线、准确度、精密度、分析灵敏度、特异性及临床考核实验。结果1.确定了仪器的最佳工作条件以及检测试剂的最佳反应浓度及反应时间:磁棒最佳震动档位为5档,化学发光时间峰值点在8 min,最佳磁珠用量为20μL,鼠抗人抗体复合物最佳稀释比例为1:2,ALP标记的羊抗鼠抗体浓度的最佳比例1:4000,磁珠上HSV抗原与抗体的最佳反应时间20 min,鼠抗人单克隆抗体与山羊抗鼠单克隆抗体的最佳反应时间为10 min。2.该方法的检测范围为0～30 Index（HSV Value）,检测灵敏度为0.0024Index（HSV Value）,精密度分析得到的批间CV的范围为9.73%～13.77%之间,批内CV的范围为5.07%～8.60%之间,回收率为92.17%～94.02%。基于该检测系统检测了20例临床患者血清中HSV抗体含量,并与目前市场上检测HSV结果认可度较高的意大利索林发光仪检测结果数据进行比较,两者有很好的的符合率100%。结论本研究成功建立了一种磁酶免发光检测体系,利用磁棒转移上吸式技术进行磁珠分离,无需液路系统,实现了系统体积的小型化,同时降低了制造成本。在将该体系应用于检测HSV中灵敏度（0.0024 Index）优于意大利索林化学发光仪（0.01 Index）;加标回收率在92.17%～94.02%之间,表明我们的方法有较高的准确性,批间CV的范围为9.73%～13.77%之间,批内CV的范围为5.07%～8.60%之间,与意大利索林化学发光仪的CV接近。血红蛋白在0～5000μg/m L范围内时,CV=2.79%;胆红素在0～210μg/m L范围内时,CV=4.349%,均在可接受范围内,表明该方法抗血红蛋白和胆红素干扰能力较强,临床考核实验结果表明20例临床血清标本与索林化学发光仪检测阴、阳性符合率100%,该检测体系上述性能验证均达到体外诊断的相关检测的标准和要求,在基层医院有着非常广阔的临床应用前景。
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