西南委陵菜中黄酮的成分分析与性质研究

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西南委陵菜(Potentilla fulgens)为多年生草本植物。性味:苦、涩,寒。疗效:清热解毒,涩肠止泻,凉血止血。生海拔1100~3600m的山坡、草地、灌丛、林缘及林中。迄今为止西南委陵菜尚未被中国药典(2010年)作为一种中药材所收录,亦少见国内外对其黄酮类化合物的提取、纯化、化学成分以及生物活性的研究报道,因而具有较高研究价值。本文包括利用微波辅助法提取西南委陵菜黄酮、利用大孔吸附树脂对西南委陵菜黄酮纯化、利用高效液相色谱电喷雾离子化串联二级质谱(HPLC-ESI-MS/MS)对西南委陵菜黄酮成分进行定性定量分析、利用五种化学方法和细胞模型法测定了西南委陵菜黄酮类化合物的抗氧化性四个部分。利用微波法以乙醇作为提取剂提取了西南委陵菜黄酮,考察了乙醇浓度、料液比、提取温度、微波功率和提取时间对西南委陵菜黄酮提取得率的影响。结果表明,微波法提取西南委陵菜黄酮的最佳条件是乙醇浓度50%、料液比1:30、提取温度60℃、微波功率400W、提取时间5min。黄酮的最佳得率为5.68%。通过研究七种大孔吸附树脂的吸附和解吸实验,发现大孔吸附树脂D101对西南委陵菜黄酮的纯化效果最佳。采用动态法对样品液的吸附流速和pH值、解吸剂pH值和乙醇浓度进行了研究。采用高效液相色谱法表征了分离纯化效果。实验结果表明,大孔吸附树脂D101对西南委陵菜总黄酮的最佳吸附解吸条件为:样品液吸附流速2BV/h、样品液pH4、解吸剂pH8、解吸剂乙醇浓度60%,使纯度由28.2%提高到46.6%。利用高效液相色谱电喷雾离子化串联二级质谱(HPLC-ESI-MS/MS),根据保留时间、分子离子、二级质谱碎片,对西南委陵菜黄酮成分进行定性分析,通过多反应监控模式(MRM)监控特定碎片离子进行了定量分析。西南委陵菜黄酮的主要成分是:芹黄素-7-O-β-D-葡糖苷酸6.66μg/mg、金丝桃苷2.39μg/mg、紫云英苷2.30μg/mg、野黄芩苷1.95μg/mg、木犀草苷0.44μg/mg、翻白叶苷A0.39μg/mg和异牡荆素0.01μg/mg。考察了西南委陵菜黄酮的总抗氧化活性、清除羟自由基能力、清除超氧阴离子自由基能力、清除DPPH自由基能力和对卵黄脂蛋白过氧化的抑制作用,并以抗氧化剂抗坏血酸为对照。结果表明西南委陵菜黄酮是一种优良的天然抗氧化剂,特别是西南委陵菜黄酮清除羟自由基抑制能力约为抗坏血酸的6倍,对卵黄脂蛋白过氧化的抑制作用为抗坏血酸的近3倍。此外,西南委陵菜黄酮在结肠癌细胞(HT-29)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)两种细胞中表现出明显的抗氧化活性,其抗氧化性随浓度递增。
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