酚氧化酶(phenoloxidase，PO)(EC1.14.18.1)是一种广泛存在于动物、植物、昆虫、微生物及人体内的一种结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶，在昆虫生理发育和内源性免疫过程中具有重要作用，如昆虫黑化、伤口愈合等。本课题组在前期研究中得到了编码小菜蛾(Plutella xylostella L.)酚氧化酶原PxPPO1基因的mRNA，并研究了它在小菜蛾虫体中的时空表达情况。本文在此基础上通过染色体步移法，克隆得到了编码小菜蛾酚氧化酶原的PxPPO1全基因，通过对PxPPO1基因的序列进行分析，得到PxPPO1基因的内含子和外显子及其所在位置，计算了内含子AT％含量、接头、碱基大小等信息，这为深入研究该基因的结构与功能奠定了基础。本研究的主要内容如下:　　1.通过对GenBank中搜索到的鳞翅目PPO1基因序列进行比较，选取最保守序列设计引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增，得到一段包含内含子在内的基因序列。以得到的基因序列作为染色体步移法的引物模板，设计5端上游3条嵌套式特异性引物，进行5侧翼端扩增。通过多次步移，将所得序列拼接后得到小菜蛾PxPPO1基因全序列，共计7202bp。　　2.通过在线分析软件EMBOSS Needle和NCBI BLAST程序对PxPPO1基因序列分析，分析得出该序列含有12个外显子和11个内含子，其中4745bp的碱基为内含子序列，5端有一个407bp非编码区，内含子中A+T碱基构成为60.9％，G+C碱基组成为39.1％。　　3.选取内含子I3和I9，运用DNAMAN软件预测内含子二级结构、5端剪接位点、3端剪接位点和分枝位点，预测结果显示I3和I9两个内含子均符合真核细胞mRNA的剪接规律。将所有内含子与外显子的接头碱基序列找出并进行比较，第8个内含子3端为AC，其余接头碱基序列均为GT-AG，符合真核生物基因中GT-AG剪接规律。　　4.运用在线软件EMBOSS CpGplot预测内含子中CpG岛的分布，结果显示在内含子中未发现CpG岛;运用软件TFSEARCH预测基因内含子潜在的转录因子结合位点，预测结果为第2、4、5、7内含子中分别存在一个CAAT框，在第2、3、6内含子中分别存在一个TATA框，第7内含子中存在两个TATA框;软件RepeatMasker对基因重复序列进行预测，结果显示Simple repeats有两处，长度为47bp，占序列的0.62％。