【摘 要】
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目的:研究宫颈癌组织和细胞中TCP11基因的表达及其与患者病理特征、预后和HPV（Human Papillomavirus）感染之间的关系;探讨TCP11基因的差异表达对宫颈癌细胞的增殖、迁移、细胞周期、细胞凋亡以及EMT（Epithelial to mesenchymal transition）相关分子的影响。方法:（1）运用The Human Protein Atlas（HPA）、UALCAN
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（NO:82060518,U1503125）； 新疆生产建设兵团国际科技合作计划项目（2019BC007）；
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目的:研究宫颈癌组织和细胞中TCP11基因的表达及其与患者病理特征、预后和HPV（Human Papillomavirus）感染之间的关系;探讨TCP11基因的差异表达对宫颈癌细胞的增殖、迁移、细胞周期、细胞凋亡以及EMT（Epithelial to mesenchymal transition）相关分子的影响。方法:（1）运用The Human Protein Atlas（HPA）、UALCAN和Gene Expression Profiling Interactive Analysis（GEPIA）数据库预测分析TCP11基因在宫颈癌中的表达及其与患者年龄、肿瘤分级和生存率的相关性。（2）免疫组织化学法检测分析TCP11基因在正常宫颈和宫颈癌组织芯片中的表达情况。（3）收集的宫颈组织样本运用第二代杂交捕获技术（HC-2）检测其HPV感染情况。（4）Western blot和q RT-PCR（Real-time Quantitative Polymerase chain reaction）分别检测宫颈癌细胞中TCP11蛋白质和m RNA表达水平。（5）设计构建过表达TCP11基因的重组慢病毒感染宫颈癌He La和Si Ha细胞以及干扰TCP11基因的si RNA转染He La细胞,并运用Western blot和q RT-PCR验证其过表达/干扰的转染效果。实验组分为:LV-TCP11和si-TCP11;对照组分为:LV-NC和si-NC。（6）噻唑蓝（MTT）实验、克隆形成实验和细胞免疫组织化学（Immunocytochemistry,ICC）实验检测过表达TCP11基因后宫颈癌He La和Si Ha细胞的增殖能力;噻唑蓝（MTT）实验和克隆形成实验检测干扰TCP11基因后He La细胞的增殖变化。（7）Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测过表达/干扰TCP11基因后宫颈癌细胞的迁移能力。（8）流式细胞术检测过表达TCP11基因对宫颈癌He La和Si Ha细胞周期和细胞凋亡的影响。（9）Western blot检测过表达TCP11基因后细胞周期相关分子CDK1、Cyclin B1和凋亡相关分子cleaved-PARP、Caspase-3及其剪切体的蛋白质表达;q RT-PCR检测过表达TCP11基因后细胞周期相关分子CDK1、Cyclin B1 m RNA的表达。（10）Western blot和q RT-PCR检测TCP11基因与EMT相关分子（ZO-1和E-cadherin）之间的关系。结果:（1）HPA数据库、UALCAN数据库和GEPIA数据库分析显示TCP11基因在宫颈癌组织中高表达（P＜0.05）,其表达与宫颈癌患者的年龄和肿瘤分级无关（P＞0.05）,但TCP11高表达对患者预后有利（P＜0.05）。（2）组织芯片结果表明TCP11蛋白质在宫颈癌组织比正常宫颈组织表达水平明显增高（P＜0.05）。HC-2结果显示TCP11基因的表达可能不受HPV感染的影响（P＞0.05）。（3）TCP11蛋白质和m RNA在宫颈癌He La、Si Ha和C33A细胞中表达水平明显高于永生化的正常上皮细胞Ha Ca T（P＜0.05）。（4）过表达TCP11基因抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移;反之,干扰TCP11基因则促进He La细胞的增殖和迁移。（5）过表达TCP11基因后宫颈癌He La和Si Ha细胞周期发生阻滞,细胞周期相关分子CDK1和Cyclin B1表达量降低;细胞凋亡率增加,细胞凋亡相关分子cleaved-PARP、Caspase-3及其剪切体的表达量增加。（6）过表达TCP11基因增加EMT相关分子紧密连接蛋白ZO-1和钙黏附蛋白E-cadherin的表达,增强了宫颈癌细胞间的紧密连接和黏附性。结论:（1）TCP11基因在宫颈癌组织和细胞中高表达,其表达与HPV感染无相关性,但TCP11高表达对患者的预后有利。（2）过表达TCP11基因后,宫颈癌He La和Si Ha细胞的增殖和迁移受到抑制,细胞周期阻滞,细胞凋亡率增加。TCP11基因可能作为宫颈癌生物标志物,在预防、治疗宫颈癌和分析宫颈癌的预后发挥作用。
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