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铜色牛肝菌(Boletus aereus)别名黑牛肝菌,属于牛肝菌属,主要分布于四川、贵州、云南、欧洲等地,具有“高蛋白、低脂肪、低热量”等特点,是一种极具营养价值和商业价值的食用菌。铜色牛肝菌多糖具有抗衰老、抗氧化、抑菌、抗肿瘤等功能,逐渐成为食品、医药等行业的研究热点。本论文研究了铜色牛肝菌多糖的不同提取方法,并采用响应面法进行优化；分离纯化了铜色牛肝菌粗多糖,并对纯多糖的分子量及单糖组成进行了测定；最后,分别研究了粗多糖、纯多糖的体外抗氧化活性。主要研究内容、方法和结果如下：1.比较了5种铜色牛肝菌多糖的提取工艺：热水提取、碱液提取、微波辅助提取、超声波辅助提取以及酶法辅助提取。5种铜色牛肝提取工艺的提取率分别为14.73%、17.3%、12.55%、14.37%和18.16%。通过对5种提取方法的比较可知,酶辅助提取法在提取条件和多糖提取率上都具有优势,故利用响应面法对其进行优化。纤维素酶辅助提取法经响应面法优化的最佳工艺条件为：酶加量834U-百1、pH值为5.4、酶解温度51℃、酶解时间53min,水浴温度50℃、水浴时间2.5h、料液比1：40g·mL-1,在此条件下铜色牛肝菌多糖提取率可达18.46%。2.铜色牛肝菌粗多糖经过Sevage法脱蛋白、透析袋去除小分子物质,得到铜色牛肝菌精制多糖。对其进行DEAE-52纤维素柱层析,分别采用蒸馏水、氯化钠溶液(0.3mo1·L-I)对精制多糖进行阶段洗脱,得到2种多糖组分：PB-1和PB-2；分别对PB-1和PB-2进行Sephadex G-100柱层析,各得到一种组分：PB-1A和PB-2A。经过凝胶柱检测、比旋光度测定和紫外光谱分析这3种方法的验纯,证明PB-1A和PB-2A都为均一多糖。3.经试验研究表明,冻干后的PB-1A和PB-2A能够溶于水、稀碱、稀酸,在温度较高的水中,会出现溶解加快的现象,但在乙醚、甲醇、乙醇、氯仿、丙酮等有机溶剂中无法溶解；不含淀粉、氨基酸、游离单糖、还原糖、蛋白质类物质、酚类物质。采用凝胶过滤法测定PB-1A和PB-2A的分子量分别为87.03kDa和24.38kDa。HPLC测定PB-1A含有五种单糖,分别为甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖,其摩尔比为0.80：0.20：1.36：0.21：1.00；PB-2A也同样含有这五种单糖,其摩尔比分别为1.61：0.45：1.00：0.43：1.16。4.以羟基自由基的清除能力、DPPH自由基的清除能力以及还原力作为指标,测定铜色牛肝菌粗多糖、PB-IA和PB-2A的抗氧化活性。结果表明铜色牛肝菌粗多糖与纯化后的多糖抗氧化活性都呈现明显的浓度依赖性。铜色牛肝菌粗多糖表现出良好的DPPH清除活性和还原能力,其IC50值分别为0.60mg·mL-1、 1.13mg-mL-1,但羟基自由基清除活性较弱,IC50值为3.29mg·mL-1。PB-1A羟基自由基的清除能力、DPPH清除能力以及还原力的IC50值分别为0.96mg·mL-1、 0.34mg·mL-1和0.65mg·mL-1; PB-2A这三种指标的IC50值分别为0.67mg·mL-1、 0.14mg·mL-1和0.47mg·mL-1。由以上推出,抗氧化活性的比较结果由强到弱为：纯多糖>粗多糖,PB-2A>PB-1A。