论文部分内容阅读
目的：利用活体成像技术,建立可供活体观察的Buffalo大鼠原位肝癌模型。在此基础上,观察选择性结扎植瘤肝叶的胆管和门静脉(Bile Duct Ligation with Portal Vein Ligation, BPL),与单纯结扎门静脉(Portal Vein Ligation, PVL)比较.对肝再生及肝癌生长、转移的影响。方法：以pCDH-puromycin-CMV为载体,将荧光素酶(Lucferase, Luc)基因转染至大鼠McA-RH7777肝癌细胞,将其皮下接种Buffalo大鼠,取瘤块异体种植于大鼠肝脏左外叶,应用Luc活体荧光成像技术,结合吲哚菁绿近红外成像,观察肝肿瘤生长和转移情况。建模成功后,随机将大鼠分为三组,即左外侧叶和中叶胆管联合门静脉结扎组(BPL)、单纯门静脉结扎组(PVL)和假手术组(Sham)。分别于结扎术后1d、3d、5d、7d、14d取血后处死大鼠,解剖肝、肺,测量各肝叶重量、肝内种植肿瘤体积变化,观察有无肝内外转移。测定血清转氨酶(ALT和AST)、胆汁酸、肝内胆汁酸水平。取保留侧肝组织,Western blot则定PCNA表达量.免疫组化检测ki67阳性细胞数。结果：(1)Buffalo大鼠皮下和肝内种植成瘤率均为100%。肝内种植2w后,利用荧光素酶活体成像系统,可观察到接种肝叶内的荧光信号,并随时间推移信号范围和强度增加;利用吲哚菁绿近红外成像系统,也可见种植部位的肿瘤显影,其他肝叶未见肿瘤。4w时肿瘤仍呈局部生长,未见明显的肝内和肺转移。(2)PVL与BPL均引起肝脏萎缩-增生综合征(AHC, Atropy/hypertrophy complex),但BPL组发生得更快、更明显。术后血清转氨酶水平出现一过性升高。BPL和PVL组均显示血清胆汁酸水平显著高于Sham组,BPL组于术后1d升至峰值,为123.8±14.6μmol/L,而PVL组于术后3d升至峰值,为73.8±8.2μmol/L,Sham组为24.6±1.4μmol/L。类似血清胆汁酸变化,BPL组未结扎侧肝组织胆汁酸含量于术后1d升至峰值,为0.83±0.074μmol/g,随后迅速降低,而PVL组肝组织胆汁酸术后3d最高,为0.58±0.13μmol/g。结扎术后14d,血清转氨酶及胆汁酸均降至正常水平。(3)PCNA表达量及ki-67阳性细胞数,BPL组均比PVL组提前达峰值。(4)结扎术后7d,BPL和PVL组肿瘤体积明显大于Sham组(P<0.05),但两组间未见明显差异(P>0.05)。然而术后14d,BPL组肿瘤体积明显大于PVL组(P<0.05),并且出现肿瘤肺部转移,转移率为100%(4/4)。结论：(1)原位接种Luc-McA-RH7777细胞能在Buffalo大鼠肝内成瘤,并可通过Luc活体荧光成像系统观察肿瘤生长情况,但与ICG肝肿瘤成像类似,其强度均不同程度地受动物体壁厚度的影响,经皮观察肝内肿瘤,Luc荧光成像较ICG远红外成像敏感。(2)BPL在加速结扎肝叶萎缩的同时,比PVL更有效地促进非结扎侧肝叶的再生。(3)BPL和PVL均显示促肿瘤生长作用,随时间延长,BPL作用更为显著,并且引起肿瘤肝外转移。