CD147调控阿霉素介导的乳腺癌细胞凋亡的研究

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背景CD147是一种重要的肿瘤基因治疗的靶分子,在多种肿瘤细胞中高表达,诱导肿瘤细胞及基质细胞产生MMPs、VEGF,与MCT、 Integrin、Cyclophilins、Caveolin-1相互作用,影响着肿瘤的侵袭转移及血管新生,并在肿瘤的凋亡、多药耐药形成中发挥重要的作用。CD147与乳腺癌密切相关,在乳腺癌中高表达,与乳腺癌的病理分级及淋巴结转移相关联,并与乳腺癌患者生存期相关,有Logistic回归分析显示患者的生存期会随着CD147高表达而缩短。研究CD147是否调控化疗药物诱导的乳腺癌细胞的凋亡对乳腺癌的治疗具有一定的意义。目的探讨CD147对阿霉素介导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法1.将含有CD147及GFP全长cDNA的质粒用瞬时转染的方法转入乳腺癌MCF-7细胞,并设置空载(仅含GFP全长cDNA)质粒转染组作为对照。用Westemblot的方法检测CD147转染组及空载质粒转染组细胞中CD147蛋白水平的变化、用荧光显微镜观察CD147转染组MCF-7细胞的GFP表达情况,以验证CD147质粒是否成功转入MCF-7细胞.2.将CD147质粒用瞬时转染的方法转入乳腺癌MCF-7细胞,并设置空载质粒转染组作为对照。随后以不同浓度的阿霉素处理两组细胞,时间为48h。MTT法测定不同浓度的阿霉素对两组细胞增殖的影响。3.用流式细胞仪检测CD147转染组+阿霉素,空载组+阿霉素细胞的凋亡。4.将CD147转染组及空载质粒转染组细胞加入不同浓度阿霉素(OμM、1μM),分别标记为:CD147转染组、空载组。用Westemblot的方法检测各组细胞中CD147, Cleaved PARP蛋白水平的变化。结果1. Westemblot试验证实人乳腺癌细胞株MCF-7细胞无CD147表达,CD147质粒成功转入MCF-7细胞并表达CD147。荧光显微镜下观察CD147转染组MCF-7细胞表达绿色荧光蛋白,也验证了CD147质粒成功的转染入MCF-7细胞。2.MTT的结果表明:阿霉素能抑制MCF-7空载组细胞、CD147转染组细胞的增殖能力,并且随阿霉素浓度的增加,抑制能力也逐渐增强。在相同浓度下,阿霉素对MCF-7空载组细胞抑制率高于CD147转染组细胞。MCF-7空载组细胞IC50=1.579±0.0257μM, CD147转染组细胞IC50=2.204±0.0391μM。说明CD147对MCF-7细胞的凋亡有抑制作用。根据IC50的值,选取1μM的阿霉素进行后续的细胞凋亡实验。3.流式细胞仪检测CD147转染组MCF-7细胞的凋亡率为8.38士1.09%,明显低于空载组(P<0.05),而空载组凋亡率是21.17±1.35%,说明CD147对MCF-7细胞的凋亡有抑制作用。4.阿霉素(0μM、1μM)处理空载组细胞及CD147转染组细胞48h后,其两组细胞Cleaved PARP表达水平随阿霉素浓度增加均上调,CD147转染组细胞Cleaved PARP表达上调趋势明显低于空载组。结论1、CD147调控了阿霉素介导的人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡。2、CD147可能是一种新的乳腺癌化疗相关靶分子。
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