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目的:1.了解HBsAg阳性母亲新生儿Th1、Th2型细胞因子的表达水平。2.探讨HBsAg阳性母亲HBV复制状态、分娩方式以及新生儿HBV感染、复制状态与新生儿Th1、Th2型细胞因子的关系。3.分析新生儿Th2优势应答程度的影响因素及其交互作用,为HBsAg阳性母亲新生儿Th2优势应答机制的研究提供新思路。方法:以2011年6月至2013年7月在太原市第三人民医院妇产科分娩的HBsAg阳性母亲及其新生儿323对作为研究对象,面对面调查和病历查阅相结合收集母亲及新生儿的一般情况,采集分娩前母亲肘静脉血3ml及出生后24h内,主、被动免疫前新生儿股静脉血3ml,于-80℃冰箱中保存备检。电化学发光法(ECLIA)检测HBV血清学标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);real-time PCR-TaqMan探针法检测PBMC HBV cccDNA和血清HBV DNA;ProcartaPlex多因子分析技术检测新生儿外周血Th1(IL-2、IFN-γ、TNF-ɑ)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平。以新生儿Th1细胞因子之和与Th2细胞因子之和的比值计算Th1/Th2比值,即按以下公式计算:Th1/Th2=(IL-2+IFN-γ+TNF-ɑ)/(IL-4+IL-6+IL-10)。Th1/Th2比值反映新生儿Th2优势应答程度,若比值越低,则其Th2优势应答程度越高。采用病例对照研究的方法探讨新生儿Th2优势应答程度的影响因素。以新生儿Th1/Th2比值中位数为界,将新生儿分为Th1/Th2低比值组(病例组161例)和Th1/Th2高比值组(对照组162例),单因素分析和多因素非条件logistic回归分析探讨新生儿Th2优势应答程度的影响因素。采用Epidata 3.1建立数据库,采用SPSS 19.0软件进行数据整理和分析,定量资料采用Wilcoxon秩和检验进行分析,定性资料采用趋势χ~2检验、χ~2检验或Fisher确切概率法进行分析。采用非条件logistic回归模型进行多因素分析,在logistic回归模型中引入影响因素的乘积项进行两个因素的相乘交互作分析,当乘积项系数的P<0.05,则存在相乘交互作用。通过Andersson等人编制的Excel软件计算相加交互的三个指标超额相对危险度(RERI)、交互作用归因比(AP)和交互作用指数(S)进行相加交互作用的分析,若RERI和AP这两个指标的可信区间包含0,S的可信区间包含1时,认为两因素间不存在相加交互作用。结果:一、HBsAg阳性母亲及其新生儿的一般情况本次研究共纳入323对HBsAg阳性母亲及其新生儿,HBsAg阳性母亲年龄范围在18-45岁之间,平均为(27.59±4.11)岁;孕周平均为(39.04±1.12)周;家庭年收入以3万-5万之间居多(57.28%,185/323);孕期在职工作的孕妇所占比例较小(24.77%,80/323);孕妇多无乙肝家族史(71.52%,231/323);孕期服用抗病毒药物的孕妇较少(13.31%,43/323);初次孕产的孕妇占比为50.15%(162/323)。新生儿男女性别比为1.14:1;出生身长范围在46cm-55cm之间,平均为(50.06±1.37)cm;出生体重范围在2500g-5000g之间,平均为(3392±429)g。二、HBsAg阳性母亲新生儿Th1、Th2型细胞因子水平及Th1/Th2比值HBsAg阳性母亲新生儿Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ和TNF-ɑ)平均水平:IL-2中位数为13.86 pg/ml,IFN-γ中位数为1.36 pg/ml,TNF-ɑ中位数为1.79 pg/ml;新生儿Th2型细胞因子(IL-4、IL-6和IL-10)平均水平:IL-4中位数为8.45 pg/ml,IL-6中位数为52.77 pg/ml,IL-10中位数为2.03 pg/ml。计算HBsAg阳性母亲新生儿Th1型细胞因子与Th2型细胞因子的比值,其中位数为0.19。三、HBsAg阳性母亲HBV复制状态与新生儿Th1、Th2型细胞因子的关系323例HBsAg阳性母亲血清中HBV DNA阳性率为54.80%(177/323);血清中HBeAg阳性率52.32%(169/323);PBMC HBV cccDNA阳性率为17.65%(57/323)。将PBMC HBV cccDNA、HBV DNA和HBeAg进行相关性分析,结果表明:PBMC HBV cccDNA与血清HBV DNA(r=0.43,P<0.001)以及HBeAg水平均呈正相关(r=0.49,P<0.001),血清HBV DNA与HBeAg水平亦呈正相关(r=0.61,P<0.001)。分析母亲复制状态与新生儿Th1、Th2型细胞因子表达水平的关系,结果显示:母亲PBMC HBV cccDNA阳性和阴性者新生儿IL-2(13.96 pg/ml vs 13.86 pg/ml)、IL-6(117.66 pg/ml vs 43.22 pg/ml)、IL-10(2.84 pg/ml vs 1.86 pg/ml)以及Th1/Th2比值(0.12 vs 0.22)水平存在差异,母亲PBMC HBV cccDNA阳性者IL-2、IL-6以及IL-10水平高于阴性者,而Th1/Th2比值明显小于阴性者,且差异有统计学意义(Z=2.12,P=0.034;Z=2.66,P=0.007;Z=1.97,P=0.048;Z=-2.18,P=0.029)。以母亲血清HBeAg和血清HBV DNA载量分组后比较新生儿Th1、Th2型细胞因子水平及Th1/Th2比值,均未发现明显差异(P>0.05)。四、分娩方式与新生儿Th1、Th2型细胞因子水平的关系323例HBsAg阳性孕妇中,阴道分娩144例,剖宫产179例,比较HBsAg阳性母亲不同分娩方式组新生儿Th1、Th2型细胞因子水平的差异,结果显示经阴道产分娩的新生儿IL-6(104.73 pg/ml vs 31.22 pg/ml)和IL-10(6.88 pg/ml vs 0.90 pg/ml)明显高于剖宫产新生儿,Th1/Th2比值(0.10 vs 0.34)明显低于剖宫产新生儿,差异均有统计学意义(Z=-4.85,P<0.001;Z=-10.99,P<0.001;Z=-6.05,P<0.001)。五、新生儿HBV感染及复制状态与Th1、Th2型细胞因子水平的关系323例HBsAg阳性母亲新生儿中,HBsAg阳性率为13.31%(43/323),HBeAg阳性率为43.65%(141/323),HBV DNA阳性率为1.55%(5/323)。分析新生儿HBV感染及复制与Th1、Th2型细胞因子表达水平的关系,结果显示:与阴性者相比,新生儿HBsAg阳性者TNF-α(1.79pg/ml vs 1.12pg/ml)表达水平升高,IL-10(10.16 pg/ml vs 1.12 pg/ml)表达水平降低,Th1/Th2比值(0.10 vs 0.21)降低,且差异有统计学意义(Z=-2.53,P=0.011;Z=4.00,P<0.001;Z=-2.22,P=0.027)。以新生儿血清HBeAg和血清HBV DNA分组后比较Th1、Th2型细胞因子及Th1/Th2比值,均未发现显著性差异(P>0.05)。六、新生儿Th2优势应答的影响因素及因素间交互作用分析根据新生儿Th1/Th2比值判断新生儿Th2优势应答程度,按中位数0.19分成两组,Th1/Th2低比值组161例和Th1/Th2高比值组162例,Th1/Th2低比值组即病例组,表示新生儿免疫呈Th2强优势应答。比较母儿不同特征时新生儿Th2强优势应答的发生比例,结果显示母亲年龄、受教育程度、家庭年收入、孕期职业、孕周、乙肝家族史、抗病毒药物服用情况及既往孕产史和新生儿出生身长、出生体重、性别及Apgar评分不同组间新生儿Th2强优势应答比例的差异均无统计学意义(P>0.05)。母亲HBV复制状态、分娩方式、新生儿HBV感染及复制状态对新生儿Th2优势应答程度影响的单因素分析,结果显示,经阴道产的新生儿发生Th2强优势应答的比例明显高于剖宫产组,差异有统计学意义(70.14%vs 33.52%,χ~2=42.81,P<0.001);母亲HBV复制、新生儿HBV感染及复制不同组间新生儿发生Th2强优势应答比例的差异无统计学意义(P>0.05)。控制母亲年龄、受教育程度、家庭年收入、孕期职业、孕周、乙肝家族史、既往孕产史、分娩方式、血清HBeAg、HBV DNA及新生儿性别、出生身长、体重、Apgar评分、血清HBsAg,HBeAg和HBV DNA后,母亲PBMC HBV cccDNA阳性新生儿发生Th2强优势应答的风险是母亲PBMC HBV cccDNA阴性新生儿的2.40倍(OR=2.40,95%CI:1.12-5.16);阴道分娩的新生儿发生Th2强优势应答的风险是剖宫产新生儿的5.49倍(OR=5.49,95%CI:3.15-9.59)。进一步分析母亲PBMC HBV cccDNA和分娩方式的交互作用,结果未显示二者之间存在相乘或相加交互作用。结论:1.HBsAg阳性母亲PBMC HBV复制状况与其新生儿Th1、Th2水平及比值有关;HBsAg阳性母亲PBMC HBV复制是新生儿发生Th2强优势应答的危险因素,提示HBsAg阳性母亲PBMC HBV复制状态可以一定程度预判新生儿Th2优势应答情况;控制母亲PBMC HBV复制,可能有利于减轻HBsAg阳性母亲新生儿Th2优势应答,提高机体清除病毒的能力。2.阴道分娩与HBsAg阳性母亲新生儿Th2型细胞因子升高及Th1/Th2比值降低有关,是新生儿发生Th2强优势应答的危险因素,与剖宫产相比,HBsAg阳性母亲阴道分娩的新生儿Th2优势应答更强,说明对于HBsAg阳性母亲新生儿这一特殊人群,阴道分娩母亲的新生儿呈Th2优势应答,HBsAg阳性母亲分娩方式的选择仍需要进一步的深入研究。3.新生儿HBV感染与其Th1型细胞因子水平降低、Th2型细胞因子水平升高及Th2优势应答程度高有关,但未进入多因素logistic模型,相关问题有待进一步研究。