论文部分内容阅读
芳香化酶(aromatase)基因的全称是细胞色素P450芳香化酶基因(cytochrome P450 aromatase),可缩写为P450arom或CYP19,芳香化酶是由CYP19基因编码,该酶是催化雄性激素合成雌性激素的限速酶及关键酶,对维持类固醇激素间的生理平衡具有重要作用,并对研究鱼类性别决定及分化机制有重要的参考意义。本文采用RT-PCR与RACE的方法,分别获得了4个CYP19基因片段。经测序和同源性分析发现,其中2个CYP19基因序列与斑马鱼CYP19a序列相似度达83%,另外两个与稀有鮈鲫的CYP19b序列相似度达84%,因此可认为所克隆的片段分别是CYP19a和CYP19b两种基因。根据命名法则命名为:MaCYP19a、PdCYP19a和MaCYP19b、PdCYP19b。用DNAMAN软件进行序列结果分析:MaCYP19a cDNA克隆片段大小为1815bp,含有503bp3’UTR,编码432个氨基酸残基;PdCYP19a cDNA克隆片段大小为1802bp,含有506bp3’UTR,编码430个氨基酸残基;MaCYP19b cDNA保守片段大小为428bp,编码142个氨基酸残基;PdCYP19b cDNA克隆片段大小为429bp,编码142个氨基酸残基。用MEGA4.0软件对15个物种的CYP19基因进行聚类分析,这两种泥鳅的CYP19基因分属于两个分支,即脑芳香化酶基因和性腺芳香化酶基因,CYP19基因与斑马鱼、鲤鱼的同源性最高,说明芳香化酶基因在进化上相对保守。以GAPDH为参照,用半定量RT-PCR和荧光实时定量RT-PCR两种方法研究两种泥鳅中CYP19在成体不同组织和胚胎不同发育时期的特异性表达,得出CYP19基因在脑和性腺的表达活性最高,在胚胎不同时期CYP19a和CYP19b基因表达差异较大。