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背景:雌激素在中枢神经系统内的作用已被广泛证实,如调节突触可塑性,抗Aβ生成及氧自由基形成等。GPR30是近年来新发现的雌激素膜受体,研究表明,雌激素可通过与GPR30受体结合激活多条信号转导通路对H202诱导的神经细胞损伤模型产生保护作用,推测GPR30是潜在的防治神经退行性病变的靶点。目的:本课题组前期研究发现,锁阳乙酸乙酯提取物（EtOAc extract of Cynomorium Son-garicum,ECS）具有雌激素样作用,可提高去卵巢大鼠的学习记忆能力及血清E2水平,对Aβ损伤SK-N-SH细胞有一定的保护作用。为了探寻ECS发挥神经保护作用可能的机制,实验以Neuro2a细胞为模型,给予不同的雌激素受体阻断剂,以突触可塑性相关蛋白突触素（Synaptophysin,syn）为指标,检测ECS对syn表达的影响,进而明确ECS可能激活的雌激素受体类型及参与调节突触可塑性的信号转导通路。在此基础上,用H202诱导神经细胞损伤模型,检测ECS是否具有抗氧化损伤的作用。以突触可塑性相关蛋白syn和PSD95及MAPK/erk和p38蛋白为指标,检测H202损伤神经细胞的分子机制,及ECS抗氧化损伤的机制,为ECS防治神经退行性病变提供实验依据。方法:第一部分:以Neuro2a细胞为模型,使用CCK8法检测ECS对不同细胞存活率影响,并观察ECS对细胞形态的影响。应用Western blot法,给予雌激素ER受体阻断剂ICI182780和GPR30受体阻断剂G15检测ECS对细胞突触可塑性相关蛋白syn和MAPK通路p-CREB和p-erk蛋白表达影响。应用MAPK通路阻断剂PD98059检测ECS对p-CREB和p-erk蛋白表达影响。采用间接免疫荧光法检测经ECS和G15处理后Neuro2a细胞syn蛋白的分布和表达情况。第二部分:H2O2损伤神经细胞模型的建立,使用CCK8法检测不同浓度H202对Neuro2a细胞存活率的影响,并在不同时间点检测ECS对H202损伤Neuro2a细胞的存活率影响。第三部分:H2O2损伤Neuro2a细胞及ECS的抗氧化损伤作用机制进行研究。应用Western blot法检测H2O2对Neuro2a细胞syn和PSD95蛋白表达的影响,及MAPK通路p-erk和p-p38蛋白表达情况。使用G15检测ECS对H202处理后的syn和PSD95蛋白表达影响,及应用MAPK通路阻断剂检测PD98059、p38通路阻断剂SB203580观察ECS对H202处理后syn和PSD95蛋白及p-erk和p-p38蛋白表达的影响。结果:1.在完全培养条件下,CCK8实验结果显示100mg/L ECS作用于Neuro2a细胞24h,可显著提高细胞存活率,对原代神经细胞存活率无显著影响。倒置显微镜下观察,细胞形态无明显变化。2.western blot实验结果显示ECS可促进syn蛋白表达,GPR30受体拮抗剂G15可以抑制ECS的作用,ER受体拮抗剂ICI182780不能抑制ECS的作用。ECS还可以促进MAPK通路p-CREB、p-erk蛋白表达。MAPK通路阻断剂PD98059及GPR30受体拮抗剂G15可抑制ECS的作用。免疫荧光结果显示syn的免疫反应产物呈斑点状散在分布,主要定位于细胞突起部分,ECS干预后,细胞内syn免疫反应产物增多。3.在完全培养条件下,CCK8实验结果显示H202可显著降低Neuro2a细胞存活率,200 μ M H202干预2h后,细胞存活率在50%左右。100mg/L ECS作用于Neuro2a细胞24h后,可显著提高H202损伤细胞存活率。4.western blot实验表明H202可显著降低syn蛋白和PSD95蛋白表达,ECS可促进H202损伤Neuro2a细胞syn蛋白和PSD95蛋白表达,GPR30受体拮抗剂G15、PD98059和SB203580可抑制ECS的作用。H202可提高MAPK通路p-p38表达,降低p-erk蛋白表达,ECS可抑制H202的作用,PD98059和SB203580可抑制ECS的作用。结论:ECS可以在离体层次上表现出神经保护作用,可能的原因是通过激活GPR30受体,调控MAPK/erk通路,引起cAMP应答元件结合蛋白CREB的磷酸化,调节基因的转录翻译,促进突触功能蛋白syn表达。H202对Neuro2a细胞有一定损伤作用,可显著降低细胞存活率,抑制syn和PSD95表达,促进MAPK通路p-p38表达,抑制p-erk表达。ECS对H202损伤Neuro2a细胞有一定保护作用,可能的原因是ECS通过激活GPR30受体调控MAPK通路并引起突触可塑性相关蛋白syn和PSD95表达改变,发挥神经保护作用。