白藤梨多糖抗肿瘤及免疫调节作用研究

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目的:白藤梨为猕猴桃科植物毛花猕猴桃Actinidia eriantha Benth.的干燥根,我国民间用其治疗胃癌、乳癌、食管癌和子宫体腺癌等,药理学试验表明毛花猕猴桃根的水提取物具有抗肿瘤和免疫调节活性,然而,其抗肿瘤活性成分研究迄今未见报道。我们比较了白藤梨水提取物、乙醇提取物体内对S180和H22的抑制活性,发现白藤梨水提取物体内对S180和H22的抑制活性明显的大于乙醇提取物。表明其抗肿瘤活性成分可能为多糖。  本文通过研究从白藤梨提取的多糖对荷 S180肉瘤小鼠抗肿瘤和免疫应答作用的影响,旨在客观评价白藤梨多糖对移植肉瘤的抑制情况,进一步探讨白藤梨多糖的抗肿瘤作用及机理。  方法:①采用水提醇沉、Sevage法除蛋白、透析、冷冻干燥从白藤梨中提取得到的白藤梨粗多糖(CAEP),粗多糖经过DEAE-Sephadex A-50和 Sephacryl S-400凝胶柱进一步纯化得到AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四个纯化多糖。通过硫酸-苯酚法、硫酸-咔唑法、紫外扫描和GC色谱法对粗多糖进行了分析测定。采用IR、紫外、GC色谱法对粗多糖的结构进行初步分析。并用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对四个纯化多糖的平均分子量进行了测定。  ②试验建立S180实体瘤小鼠模型,分别连续10天灌胃给以2.5,5.0,10 mg/kg的AEPS溶液,末次给药24h后剖瘤测定抑瘤率;采用MTT法检测了AEPS溶液灌胃给药后对S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性、脾细胞产生IL-2水平的影响;运用酶联免疫吸附法(间接 ELISA法)检测了荷瘤小鼠血清中肿瘤的特异性抗体(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。  ③试验建立S180实体瘤小鼠模型,分别连续10天灌胃给以10 mg/kg的CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液,末次给药24h后剖瘤测定抑瘤率;采用MTT法检测了CAEP、AEPA、AEPB、AEPC和AEPD溶液灌胃给药后对S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖反应、NK细胞活性、脾细胞产生IL-2水平的影响;运用酶联免疫吸附法(间接ELISA法)检测了荷瘤小鼠血清中肿瘤的特异性抗体(IgG, IgG1, IgG2a和IgG2b)水平。  结果:①从白藤梨中提取的粗多糖中总糖和糖醛酸的含量分别为62.42%和3.7%。紫外扫描实验发现该多糖在260nm和280nm没有吸收,说明多糖中不含蛋白质和核酸。GC表明白藤梨粗多糖由鼠李糖、岩澡糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成,各单糖的摩尔百分含量为1.72%、14.12%、27.40%、3.53%、4.80.%、9.37%、39.06%。摩尔比为0.4∶3∶6∶0.8∶1∶2∶8。AEPA、AEPB、AEPC、AEPD四个纯化多糖的平均分子量分别为1.43×106、2.06×106,、1.73×106和1.13×106。  ②从白藤梨中提取和分离出来的总多糖AEPS低、中、高三个剂量均能显著的抑制S180移植瘤的生长(P<0.001),抑瘤率分别为47.81%、50.11%、55.34%。给予AEPS溶液后荷瘤小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力显著地提高或极显著的提高(P<0.05,P<0.001),而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠体内T、B淋巴细胞的增殖能力显著的降低(P<0.05)。MTT法检测AEPS溶液口服给药后S180荷瘤小鼠NK、CTL细胞的活性和脾细胞产生IL-2水平的结果显示,AEPS三个剂量均可极显著地提高荷瘤小鼠NK细胞和CTL的活性(P<0.001),且均可同时显著诱导荷瘤小鼠脾细胞分泌IL-2(P<0.05或P<0.01)。而CTX对照组小鼠NK、CTL细胞的活性和脾细胞分泌IL-2的能力均极显著低于对照组(P<0.01, P<0.001)。间接ELISA法检测荷瘤小鼠血清中肿瘤的特异性抗体水平结果显示,环磷酰胺能极显著地降低荷瘤小鼠血清中肿瘤抗原特异性IgG、IgG2a和IgG2b抗体水平(P<0.01),而AEPS低、中、高三个剂量均能显著提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗体水平。荷瘤小鼠血清中IgG1抗体水平很低。这表明AEPS在体内主要激发Th1型免疫应答。  ③白藤梨粗多糖及其四个多糖组分的抗肿瘤活性及对荷瘤小鼠免疫功能影响的实验结果表明,白藤梨粗多糖及其四个多糖组分均能显著的抑制S180移植瘤的生长(P<0.001),抑瘤率分别为41.59,42.90,44.87,52.53和50.87%;对荷瘤小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力显著地提高或极显著的提高(P<0.05, P<0.01,P<0.001),而腹腔注射CTX可使S180荷瘤小鼠体内T、B淋巴细胞的增殖能力显著的降低(P<0.05)。 MTT法检测白藤梨粗多糖及其四个多糖组分溶液口服给药后S180荷瘤小鼠NK细胞的活性和脾细胞产生IL-2水平的结果显示,白藤梨粗多糖及其四个多糖组分均可显著或极显著地提高荷瘤小鼠NK细胞的活性(P<0.05, P<0.01和P<0.001),且均可同时显著或极显著地诱导荷瘤小鼠脾细胞分泌IL-2(P<0.05, P<0.01和P<0.001)。而CTX对照组小鼠NK细胞的活性和脾细胞分泌IL-2的能力均极显著低于对照组(P<0.05,P<0.01)。间接ELISA法检测荷瘤小鼠血清中肿瘤的特异性抗体水平结果显示,环磷酰胺能极显著地降低荷瘤小鼠血清中肿瘤抗原特异性IgG、IgG2a和IgG2b抗体水平(P<0.001),而白藤梨粗多糖及其四个多糖组分均能显著或极显著的提高荷瘤小鼠血清中IgG、IgG2a和IgG2b抗体水平(P <0.05、P<0.01、P<0.001)。荷瘤小鼠血清中IgG1抗体水平很低。这表明白藤梨粗多糖及其四个多糖组分在体内主要激发Th1型免疫应答。  结论:从白藤梨中提取和分离出来的多糖的抗肿瘤作用可能通过调节机体免疫功能、提高免疫应答来实现的。本研究为研究白藤梨的抗肿瘤作用提供了理论依据。
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