大肠杆菌O157:H7免疫HCR信号放大检测及沙门菌逻辑编码免疫层析高通量分群的研究

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大肠杆菌O157:H7和沙门菌都是常见的食源性致病菌。大肠杆菌O157:H7传染剂量低至10个菌,因此建立一种高灵敏的大肠杆菌O157:H7检测方法是必要的;沙门菌的血清群较多且难以分型,给沙门菌的溯源工作带来了较大难度,因此建立一种快速高通量的沙门菌分群方法是必要的。本文中,我们建立了大肠杆菌O157:H7的高灵敏检测方法和沙门菌高通量分群方法。杂交链式反应(hybridization chain reaction,HCR)是一种不需要酶的等温核酸自组装反应。近年来,HCR被广泛应用在检测信号放大的研究中。本文第二章,我们将免疫学与HCR相结合,建立了一种免疫HCR去检测大肠杆菌O157:H7。我们发现当HCR的引发链(Initiator)和抗体共同标记于一个乳胶微球上,抗体会干扰引发链(Initiator)参与HCR反应,导致了阳性信号不强,灵敏度不高;我们设计引入一条互补链(C-Initiator),将互补链和抗体标记在同一个乳胶微球上,而引发链(Initiator)单独标记在另一个乳胶微球上。这种策略降低了抗体对引发链(Initiator)参与HCR反应的干扰,从而增强信号,提高灵敏度。与基于单球的免疫HCR(2.7×10~3 CFU/mL)相比,本方法中基于双球的免疫HCR的灵敏度(4.8×10~2 CFU/mL)提高了5.6倍。沙门菌是一种常见的食源性致病菌。根据沙门菌菌体表面的特异性脂多糖(O抗原),沙门菌被分成46个血清群,各个血清群之间的抗原表达和致病力存在很大差异。沙门菌的O:2,O:3,O:4,O:7和O:9血清群在沙门菌爆发中占很大比例。由于玻片凝集试验低下的检测效率、复杂的操作和主观的判断标准,传统的沙门菌血清群分群法是非常繁琐。凭借低的检测成本、快的检测速度和好的便携特性的优势,免疫层析被广泛应用在农业和环境监测中。本文第三章,我们建立一种逻辑编码免疫层析方法去实现沙门菌血清群的快速高通量分群。通过对三条检测线进行复合编码,按特定顺序混合喷涂五种抗沙门菌O抗原抗体,实现了五种常见沙门菌血清群(O:2、O:3、O:4、O:7和O:9)的分群。本方法对于五种沙门菌血清群的敏感度和特异度分别超过了96%和97%,无需昂贵的仪器。基于以上优势,本方法值得应用和推广。
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