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目的明确云南鼠疫疫源地野外鼠形动物莫氏和斑点热群立克次体的感染状况,阐明不同地区和不同类型鼠疫疫源地野外鼠形动物感染莫氏和斑点热群立克次体的差异,探讨地理、气候、植被等生态环境因素对鼠形动物感染莫氏和斑点热群立克次体的影响。方法1.样本来源:2015~2016年在云南梁河县、剑川县和玉龙县鼠疫疫源地进行春、夏、秋、冬四次野外捕获鼠形动物,采集肝脾组织标本2512份。2.DNA提取及浓度测定:使用磁珠法微量组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA样本2512份,应用核酸浓度测定仪测量DNA浓度。3.PCR检测:选用热休克蛋白gro EL基因引物进行巢式PCR扩增,将PCR扩增的第二轮产物进行凝胶电泳,应用凝胶成像系统观察结果。4.测序:PCR阳性扩增产物由上海生工进行测序。5.序列比对及进化分析:采用DNAStar(Editseq、Seq Man、Megalign)、NCBI(Blast)、MEGA 6.0软件对测序成功序列进行同源性比对分析并构建系统发育树。6.数据统计与分析:运用Excel 2010软件录入和整理鼠形动物信息资料,采用SPSS 17.0软件对数据资料进行Fisher￠s Exact Test统计学分析。结果1.云南鼠疫疫源地共捕获野外鼠形动物3目6科19属30种2512只,齐氏姬鼠、大绒鼠和中华姬鼠的数量最多,构成比分别为31.01%(779/2512)、19.31%(485/2512)、10.91%(274/2512)。2.云南鼠疫疫源地野外鼠形动物中未检测出感染莫氏立克次体,斑点热群立克次体的感染率为0.16%(4/2512)。3.云南梁河和剑川鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体感染率分别为0.49%(3/611)、0.10%(1/1029),玉龙鼠疫疫源地未检测出感染斑点热群立克次体,感染率没有显著性差异(P=0.061)。4.云南家鼠和野鼠鼠疫疫源地斑点热群立克次体感染率分别为0.49%(3/611)、0.05%(1/1901),其家鼠鼠疫疫源地野外鼠形动物感染率高于野鼠鼠疫疫源地(P=0.047)。5.云南鼠疫疫源地检测出感染斑点热群立克次体的野外鼠形动物有锡金小鼠、斯氏家鼠、灰麝鼩和臭鼩鼱,感染率分别为1.39%(1/72)、0.86%(1/116)、4.17%(1/24)、2.04%(1/49),其感染率高于优势鼠种(P=0.023)。6.梁河鼠疫疫源地四个海拔梯度(1000~1200m、1200~1400m、1400~1600m及≥1600m)中,感染斑点热群立克次体的野外鼠形动物分布在1400~1600m和≥1600m两个海拔梯度上,感染率分别为1.32%、1.09%;剑川鼠疫疫源地三个海拔梯度(2250~2450m、2450~2650m及2650~2850m)中,感染斑点热群立克次体的野外鼠形动物分布在2650~2850m的海拔梯度上,感染率为0.43%;玉龙鼠疫疫源地四个海拔梯度(2400~2600m、2600~2800m、2800~3000m及≥3000m)均未检测出感染斑点热群立克次体;不同海拔梯度感染率均没有显著性差异(P>0.05)。7.云南鼠疫疫源地雌性和雄性野外鼠形动物斑点热群立克次体感染率分别为0.09%(1/1158)、0.22%(3/1340),感染率没有显著性差异(P=0.629)。8.从云南鼠疫疫源地捕获的野外鼠形动物主要以林地、耕地、灌丛、林地耕地交界、林地灌丛交界和耕地灌丛交界六种栖息环境为主,感染斑点热群立克次体的野外鼠形动物栖息环境均为林地,感染率为0.25%(4/1599)。9.云南鼠疫疫源地春、夏、秋、冬四个季节捕获的野外鼠形动物中,春季未检测出感染斑点热群立克次体,夏季、秋季和冬季三个季节斑点热群立克次体感染率分别为0.37%(2/540)、0.13%(1/793)、0.16%(1/641),感染率没有显著性差异(P=0.619)。10.通过分子遗传进化分析结果显示,实验检测出的4份样本gro EL基因序列均属于斑点热群立克次体,且梁河县和剑川县鼠疫疫源地gro EL基因序列间存在一定的差异。结论1.云南鼠疫疫源地野外鼠形动物中未检测出莫氏立克次体。2.云南鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体感染率低(0.16%),感染的鼠形动物有锡金小鼠、斯氏家鼠、灰麝鼩和臭鼩鼱。3.云南家鼠鼠疫疫源地野外鼠形动物斑点热群立克次体感染率高于野鼠鼠疫疫源地。4.云南鼠疫疫源地野外鼠形动物感染的斑点热群立克次体gro EL基因片段存在差异。