论文部分内容阅读
目的:T2DM已经成为影响全球健康的元凶之一,目前尚无特异性T2DM早期预测标志物,因此寻找其早期预测生物标志物十分必要。本文旨在筛选不同糖耐量状态下micro RNA的表达差异,寻找T2DM潜在的生物标志物,并初步探讨其在T2DM中的可能作用,为早期预测和干预T2DM提供新的靶点。方法:1.选取健康对照者,糖调节受损者,2型糖尿病者各2例,应用micro RNA基因芯片方法筛选各组间差异表达的mi RNA,筛选标准为两组间比较有显著性差异(倍数差异>2或倍数差异<0.5),随后在得到的有显著性差异的mi RNA中选取表达量高,倍数差异明显的mi RNA进行进一步验证及研究。2.选取健康对照者108例,糖调节受损者92例,2型糖尿病者117例,分别抽取其清晨空腹外周静脉血,提取血清,应用实时荧光定量PCR技术检测三组中mi R-3200-5p、mi R-100-5p、mi R-574-5p、mi R-3135b、mi R-1972、mi R-133b、mi R-1273f表达量以验证芯片的准确性,分析7个mi RNA与临床参数的关系,并建立ROC曲线,评价其诊断的灵敏性和特异性。最后用靶基因预测软件和KEGG通路分析软件,分析这7个mi RNA在糖尿病中可能发挥的作用。结果：1.micro RNA基因芯片结果显示,三组共2549个mi RNA,以倍数差异>2或倍数差异<0.5为标准,健康对照组与糖调节受损组间有5个差异表达的mi RNA,其中上调5个,下调0个;糖调节受损组与2型糖尿病组间有4个差异表达的mi RNA,其中上调2个,下调2个;健康对照组和2型糖尿病组有26个差异表达的mi RNA,其中上调17个,下调9个。2.根据这些mi RNA的组间差异,表达量及相关的生物学分析,选取7个mi RNA(mi R-3200-5p、mi R-100-5p、mi R-574-5p、mi R-3135b、mi R-1972、mi R-133b、mi R-1273f)进行进一步验证和研究。q RT-PCR技术检测结果显示,mi R-3200-5p、mi R-574-5p、mi R-3135b、mi R-100-5p和mi R-1972在健康对照组、糖调节受损组和2型糖尿病组的表达依次降低,其中mi R-3200-5p和mi R-574-5p三组间均有显著性差异(P<0.05),mi R-100-5p在健康对照组和糖调节受损组之间无统计学差异(P>0.05),mi R-1972在糖调节受损组和2型糖尿病组间无统计学差异(P>0.05)。mi R-133b、mi R-1273f在健康对照组、糖调节受损组和2型糖尿病组的表达先降低再上升,但mi R-133b在三组间均有统计学差异(P<0.05),mi R-1273f在糖调节受损和2型糖尿病组间无统计学差异(P>0.05)。其中,mi R-100-5p的PCR验证结果与基因芯片结果相反,其余6个mi RNA的PCR验证结果与基因芯片结果一致。3.对7个mi RNA不同组合来评估其在早期诊断2型糖尿病中的价值,发现mi R-574-5p、mi R-133b、mi RNA-3135b、mi R-1273f、mi R-1972联合检验时,区分健康对照组与糖调节受损组的诊断准确性最高,其曲线下面积为0.805(P<0.01);mi R-3200-5p、mi R-574-5p、mi R-133b、mi R-100-5p联合检验时,区分糖调节受损组与2型糖尿病组的诊断准确性最高,其曲线下面积为0.738(P<0.01);mi R-3200-5p、mi R-574-5p、mi R-1273f、mi R-100-5p联合检验时,区分健康对照组与2型糖尿病组的诊断准确性最大,其曲线下面积为0.935(P<0.01)。多元相关分析显示,与健康对照组相比,糖调节受损组和2型糖尿病组的FBG、TG、Hb A1c、BMI、WHR显著升高(P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.05);与糖调节受损组相比,2型糖尿病组FBG、SBP、DBP、TG、Hb A1c、WHR、BMI显著升高(P<0.05),HDL-C显著降低(P<0.05)。结论：1.mi RNA基因芯片结果显示,当倍数差异>2或倍数差异<0.5时,三组间分别有不同差异表达的mi RNA;2.筛选出7个mi RNA(分别为mi R-3200-5p、mi R-100-5p、mi R-574-5p、mi R-3135b、mi R-1972、mi R-133b、mi R-1273f)进行q RT-PCR验证,发现其中的6个mi RNA(除mi R-100-5p)在糖尿病的进程中有显著变化趋势,有望成为2型糖尿病早期生物学标志物。3.7种mi RNA与临床资料密切相关,且在不同的组合情况下的诊断价值不同,联合检测可提高诊断效率。同时,7种mi RNA的靶基因可能通过蛋白消化和吸收、TGF-β信号通路、胰岛分泌、p53信号通路、磷酸化信号系统等分子生物学作用和代谢通路发挥作用。