论文部分内容阅读
目的:胚胎着床是胎生哺乳动物及人类生殖生理的重要环节,是母体子宫与胚胎同步发育、在特定时期即“着床窗”开放期间精确调节、快速完成的生理现象。妊娠需要子宫组织发生广泛的重建,子宫内膜细胞生长和分化,即发生蜕膜化。子宫内膜的蜕膜化过程对于成功的着床和妊娠的维持是必需的。蜕膜化过程涉及黏附分子、蛋白水解酶、生长因子、细胞因子、血管活性因子以及多种基因的相互作用和调节。已有研究表明BMPs家族在小鼠胚胎发育过程中都有表达,为进一步研究其家族中BMP-7在小鼠子宫中的表达规律和作用,本实验采用细胞原代培养、荧光定量PCR、免疫组织化学、免疫细胞化学、Western blotting等方法从mRNA和蛋白水平检测BMP-7在妊娠小鼠子宫中的表达,探索其在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法: 1.RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5-8日小鼠子宫中的表达情况;2.原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮、雌二醇和cAMP诱导蜕膜化,并在诱导蜕膜化的同时分别加入1.0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml BMP-7重组腺病毒,于24h、48h、72h、96h检测催乳素的表达;3.去卵巢小鼠随机分3组,分别皮下注射芝麻油(0.1ml/只)、孕酮(2.0mg/只)、RU486(2.0mg/只)+孕酮(2.0mg/只),于注射后0h、6h、12h、24h处死小鼠收集子宫,提取子宫RNA和总蛋白,荧光定量PCR、Western blotting检测BMP-7的表达情况。结果:1.妊娠第5-8日,BMP-7 mRNA在小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织(P<0.01),且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强(P<0.05)。妊娠第5日、第6日,BMP-7蛋白分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带;第7日、第8日,主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。2.在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组催乳素的mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01),其中10ng/ml组增加最明显(P<0.01)。3.去卵巢小鼠模型研究显示:孕酮上调了小鼠子宫组织BMP-7的表达(P<0.01),孕酮受体拮抗剂RU486能有效阻断孕酮对BMP-7的上调作用(P<0.05)结论:BMP-7基因在小鼠子宫内的表达受孕酮调控,具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。