乳腺癌是目前全球第一大癌症,严重威胁人类健康。探究并阐明乳腺癌发生发展的分子机制和信号调节网络,鉴定乳腺癌诊断的临床标志物,并设计出可应用于乳腺癌临床治疗的靶向药物是目前研究的关键任务。孤儿核受体（Orphan Nuclear Receptors,ORs）是一类体内缺乏天然配体的核受体（Nuclear receptors,NRs）,可作为转录因子通过调控特异性基因的转录和表达影响多种生理进程。雌激素相关受体α（Estrogen-related receptorα,ERRα）是第一个被鉴定出来的孤儿核受体,研究显示ERRα在多种类型癌症中存在异常表达,可影响癌细胞的增殖及运动能力,并且其高表达同病人的不良预后存在密切联系,暗示ERRα在癌症的发生发展过程中发挥重要的调节作用。ERRα的分子功能除了受辅调节因子的影响,还受到其自身蛋白稳定性及翻译后修饰的调控,但目前关于ERRα在乳腺癌中蛋白稳定性的分子调控机制仍不明确。本研究中,我们在乳腺癌细胞中使用蛋白质组学方法鉴定与ERRα存在相互作用的蛋白,旨在寻找可调控ERRα蛋白功能的关键分子。其中发现F-box和亮氨酸重复序列蛋白10（F-box and leucine-rich repeat protein 10,FBXL10）同ERRα存在相互作用,它属于F-box蛋白家族,也属于含Jmjc结构域的组蛋白去甲基化酶家族。研究显示,FBXL10可发挥泛素E3连接酶活性促进靶蛋白的泛素化降解,也可作为转录因子调控基因转录,还可以发挥去甲基化酶活性参与表观遗传调控。在生理条件下,FBXL10可参与细胞凋亡、细胞增殖及干细胞自我更新等,同时在糖酵解、谷氨酰胺代谢等进程中发挥重要调节作用。此外,在一些癌症中可见FBXL10的高表达,如卵巢癌、胰腺导管癌、胃癌及前列腺癌等。但是目前关于FBXL10在乳腺癌中发挥的生物学功能存在争议。所以FBXL10在乳腺癌中发挥的生物学功能及调节机制值得去深入挖掘。本研究主要探究了ERRα与FBXL10在乳腺癌中的相关性及FBXL10调控ERRα蛋白稳定性的分子机制,并阐明了它们对乳腺癌细胞增殖及成瘤的影响,主要研究内容如下:（1）GST-pulldown之后进行银染,通过质谱分析鉴定出FBXL10作为ERRα的结合蛋白,鉴于两者在乳腺癌中可能存在相互作用,我们使用生物信息学分析、免疫组化和蛋白免疫印迹实验结果发现二者在乳腺癌组织及细胞中蛋白表达呈现正相关。（2）蛋白免疫共沉淀及免疫荧光等实验结果证实乳腺癌细胞中FBXL10与ERRα存在蛋白相互作用,通过构建二者的蛋白结构域截短体及功能突变体,利用免疫共沉淀实验探究它们之间的相互作用依赖的蛋白结构功能域。（3）蛋白免疫印迹及PCR等实验结果显示FBXL10可以稳定ERRα的蛋白水平,进一步的机制探究发现FBXL10可以减少ERRα多聚泛素化修饰程度,增加ERRα的单泛素化修饰进而增强ERRα的蛋白稳定性。（4）考马斯亮蓝染色结合质谱分析及蛋白免疫共沉淀等实验结果鉴定出ERRα发生泛素化修饰的9个位点,分别位于ERRα的51,76,100,125,189,208,330,394和403位的赖氨酸残基。（5）荧光素酶报告基因检测和实时定量PCR等实验结果显示,FBXL10促进了ERRα的转录活性,染色质免疫共沉淀实验结果发现FBXL10可以促进ERRα在其下游靶基因p S2和VEGFA启动区的富集,进而促进ERRα对下游靶基因的转录激活。（6）体外细胞实验结果证实FBXL10可以通过ERRα促进乳腺癌细胞的增殖和集落形成,通过构建小鼠模型发现FBXL10和ERRα在体内促进乳腺癌细胞的成瘤能力。综上所述,本研究揭示了乳腺癌细胞中FBXL10与ERRα蛋白表达的正相关性,以及FBXL10稳定ERRα蛋白水平并促进ERRα转录活性的分子机制,并从功能上探究了FBXL10/ERRα对乳腺癌细胞增殖及成瘤的促进作用,在分子水平完善了FBXL10和ERRα在乳腺癌发生发展中的机制研究,为今后乳腺癌临床靶向药物治疗提供了一定的理论基础。