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目的肝硬化（hepatic cirrhosis）是肝脏发生的慢性、进行性改变。病理上以肝组织弥漫性纤维化、假小叶和再生结节形成为特征，临床表现为肝功损害和门脉高压。肝硬化是我国常见疾病和主要死亡病因之一。目前，临床上针对肝硬化的各种治疗方法均存在某些弊端，尚无安全有效的最佳疗法。近年来，骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）因其具有多向分化潜能而成为备受关注的种子细胞。鉴于此，本实验以体外分离培养BMSCs并建立肝硬化动物模型为基础，通过体内直接输注BMSCs来检测其是否可以改善受损肝脏的肝功能，为BMSCs临床治疗肝硬化的可行性提供实验依据。实验方法一、BMSCs的分离纯化及表面标志物的检测1、BMSCs的分离纯化选取四周龄100-120g健康雄性SD大鼠，获取BMSCs，在37℃、5％CO2条件下，用含10％胎牛血清的L-DMEM培养液进行贴壁培养。当细胞达到80％-90％融合时，以1：2的比例进行传代培养，三代后获取较为纯化的BMSCs。2、BMSCs的生长曲线测定取生长良好的1代和3代细胞，消化后以1×104／ml的密度接种于24孔板内。此后，每天取三孔计数，并计算均值，连续9天。据此绘出BMSCs的生长曲线。3、BMSCs表面标记物的测定取3代较为纯化BMSCs细胞，应用免疫荧光法检测BMSCs表面标记物CD29、CD44的阳性表达并计算其阳性率。二、大鼠肝硬化模型的建立健康雌性SD大鼠80只，体重150-180g，饲养一周后随机分为三组：正常组（20只），普食普水；实验对照组（30只）和实验组（30只）均皮下注射40％四氯化碳和60％植物油混合液，0.3ml／kg体重，每周两次，连续注射八周，实验期间给予正常饮食。八周后取正常组、实验组和实验对照组大鼠肝脏作病理切片观察肝脏改变情况。三、BMSCs输注后肝功测定向实验组大鼠体内输注纯化的BMSCs，分别于一、二、三、四周处死大鼠，收集血清，检测肝功指标，观察肝脏恢复情况。实验结果1、成功培养出了BMSCs，并获得较为纯化的细胞；描绘出了BMSCs生长曲线图；检测了BMSCs的表面标记物CD29和CD44，阳性细胞数分别为9.75×104／ml和9.5×104／ml，阳性率分别为97.5％和95％。2、建立了大鼠肝硬化模型。3、血清学检测法检测了BMSCs输注后肝功的改变。结论1、可以通过体外全骨髓培养法获得纯化的BMSCs，同时证明了BMSCs具有旺盛的增殖能力。CD29和CD44可以在BMSCs表面呈强阳性表达。2、验证了皮下注射CCL4和植物油混合液可以获得死亡率较低的比较可靠的动物模型。3、肝脏直接多点注射和尾静脉注射均可成功将BMSCs植入体内并在一定程度上辅助改善肝功能。