“丹参—降香”君—使对药药代动力学及作用物质基础研究

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复方作为中药临床用药的主要形式,集中体现了中医药理论“辨证施治”的思想和治疗原则,而复方作用物质基础研究一直是中药研究的热点和难点。对药作为复方和单味药之间的桥梁,具有组成简单、便于研究的特点,而君-使对药则是由复方中的君药和使药搭配而成的特殊对药,集中体现了复方的协同增效作用。代谢组学作为一门以定量描述生物体内代谢物多参数动态变化为目标的新兴组学,在研究思路的整体性和系统性方面与中医药传统理论相吻合,因此近年来在中医药领域得到了前所未有的应用和发展。本论文选择丹参-降香君使对药为研究对象,以丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸为指标,以代谢组学为手段,研究使药降香对君药丹参药代动力学的影响和体内作用物质基础。主要研究内容及结果如下:1.建立了同时测定SD大鼠含药血浆中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛的高效液相色谱分析方法。方法学考察表明,丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛的检出限分别为0.25,0.2和0.125μg/mL,分别在250~2.5,200~2.0,125~1.25μg/mL内具有良好的线性关系,高、中、低三个浓度的提取回收率在91.17~97.02%之间,方法回收率在81.39~97.66%之间;日内日间精密度、重现性和稳定性的测定结果符合分析测定的要求;三种指标性外源性成分与血浆中的内源性成分均达到基线分离。以上结果表明该方法适合于大鼠血浆中丹参素、原儿茶醛和原儿茶酸的药代动力学研究。2.采用上述高效液相色谱方法,考察了在正常SD大鼠体内使药降香对君药丹参药代动力学的影响,并采用代谢组学的数据处理方法进行处理。结果表明:①使药降香可显著提高正常大鼠体内丹参素吸收入血的速率及生物利用度,减慢丹参素和原儿茶酸的清除率,延长在体内的停留时间以更好的发挥药理活性,从而很好的证明了使药降香的协同增效机制。②研究发现丹参药材中的水溶性成分原儿茶醛在SD大鼠体内通过一定的生理生化途径转化为原儿茶酸,并有两种代谢产物NM28和NM29生成。③主成分分析和SPSS相关性分析结果表明,代谢产物NM28、NM29和NM38、内源性物质色氨酸是引起正常丹参组和正常丹参降香组间出现显著差异的主要原因,即可能与正常大鼠体内丹参-降香君-使对药的作用物质基础有一定的关系。3.考察气滞血瘀模型大鼠灌胃丹参提取液和丹参-降香提取液后,使药降香对君药丹参中主要成分的药代动力学的影响,并采用代谢组学方法处理数据。结果表明:①模型丹参组大鼠体内,使药降香在显著加快丹参素和原儿茶酸吸收入血的同时也加快两者从机体的清除。②在正常组原有的代谢产物NM28和NM29的基础上,模型丹参-降香组中又生成了两种新的代谢产物NM30和NM38。③采用主成分分析法和SPSS相关性分析法结果表明,代谢产物NM28、NM29和NM38、内源性物质色氨酸是引起两组间出现显著差异的主要原因,即可能与气滞血瘀模型大鼠体内丹参-降香君-使对药的作用物质基础有一定的关系。4.通过给大鼠分别灌胃丹参素、原儿茶酸和原儿茶醛溶液,与拟定时间点取血测定,结果表明丹参药材中的原儿茶醛进入体内后被氧化为原儿茶酸,一部分原儿茶酸又被转化生成代谢产物NM28和NM29。并采用高效液相色谱-质谱联用技术对研究中发现的代谢产物NM28和NM29进行初步定性分析,其分子量分别为387.4和431.3。
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