目的:　　 本实验主要研究氟诱导成骨细胞MC3T3-E1发生自噬、凋亡,及两者之间的关系。通过给予MC3T3-E1细胞不同浓度的氟,探讨氟引起凋亡的具体的浓度,并在研究氟对凋亡的过程中能够研究是否存在自噬,及自噬对凋亡的影响。　　 材料和方法:　　 1.利用MTT比色法检测氟对成骨细胞MC3T3-El的增殖活性影响,探寻氟引起凋亡的浓度。　　 MC3T3-E1细胞接种于96孔培养板,每孔0.1ml培养基,24h后细胞贴壁,更换培养液,分别加入不同浓度的氟化钠,复合培养24,48小时后。加入MTT,酶标仪测量490nm波长的吸光度值(OD)。分析细胞的增殖和凋亡情况。　　 2.流式细胞术检测细胞凋亡。　　 细胞提取后,经PBS冲洗后,加入ANNEXIN-V染液10μL,及PI染液5μL,避光孵育10分钟后,上机检测。　　 3.westernblot免疫印记技术检测凋亡相关蛋白。　　 加入蛋白裂解液裂解。收集蛋白样品后测定蛋白样品的浓度,加入适量的上样缓冲液,煮沸5分钟后,冷却到室温后就可以上样,将样品加入到SDS.PAGE加样空内以恒压80v跑电泳90-120分钟,电泳后转到PVDF膜上,采用恒流300mA转膜2小时,封闭两小时后,用相应抗体孵育过夜,第二日清晨加入对应的辣根过氧化物酶标记的二抗孵育2小时,最后采用ECL,试剂来检测。利用westernblot免疫印记技术检测Beclin1蛋白及LC3蛋白表达水平及变化。　　 实验结果:　　 1.氟能明显抑制成骨细胞MC3T3-E1增殖,诱发细胞凋亡。其抑制作用呈时间、剂量依赖性。　　 2.氟在促进细胞凋亡的同时也促进自噬产生。　　 3.3-MA抑制自噬后,氟诱导的凋亡进一步增多。　　 结论:　　 1.氟明显抑制MC3T3-E1细胞增殖,同时诱发细胞凋亡和自噬。　　 2.氟诱导的自噬部分拮抗其诱导的凋亡。