鳕鱼通常指鳕形目鱼类,包含大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼、黑线鳕等经济价值较高的重要鱼类。在我国,鳕鱼的消费量逐年递增,市售鳕鱼种类繁多,其市场价格也差异悬殊。然而,大多数鳕鱼被加工制成冷冻鱼片等产品进行销售,而且产品包装缺乏正确的学名标注。消费者难以从外观上辨别出鳕鱼的真假和所属种类,由此造成了鳕鱼市场命名混乱,以次充好的复杂现状。因此,急需建立一些快速准确、简便实用的检测方法应用于市售鳕鱼成分的检测。本文以鳕科鳕鱼为研究对象,选择易与鳕鱼混淆的南极犬牙鱼和异鳞蛇鲭为阴性对照,采用荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)体系、环介导等温扩增技术(LAMP)以及胶体金(AuNPs)比色检测技术对其进行种类鉴定与分析。主要研究结果如下:1.选择16S rDNA基因设计区分鳕科和非鳕科鱼类的引物,选用线粒体Cytb基因分别设计针对大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼、黑线鳕、南极犬牙鱼以及异鳞蛇鲭的物种特异性引物,建立qPCR体系,对其进行物种鉴定分析。检测结果表明,所建立的qPCR体系具有良好的特异性和重复性,其中16S rDNA qPCR体系能够快速有效区分鳕科与非鳕科物种,5种物种特异性qPCR体系能有效鉴定目标物种。结合相应的标准曲线,可以对单一或混合样品中的目标鳕鱼进行定量检测。在单一样品中,大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼、黑线鳕、南极犬牙鱼和异鳞蛇鲭的最低绝对检出限分别为3.8、4.7、3.45、4.65和4.35 pg/μL。在模拟混合样品中,3种目标鳕鱼的相对检测灵敏度可达到0.01%。通过对20种市售鳕鱼样品的检测,本研究中设计的qPCR体系能顺利地检测出原料及深加工产品中的鳕鱼成分,而且通过3种鳕鱼的物种特异性qPCR体系检测出的阳性结果与DNA测序结果一致,说明该体系具有很强的实用性,能够满足日常检测的要求。2.建立了2种LAMP检测法(LAMP荧光法和LAMP指示剂法),用于鉴定鳕科物种,以及鳕科中大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼和黑线鳕的物种鉴定。选择12S rDNA基因用于设计区分鳕科和非鳕科物种的LAMP引物,选择线粒体Cytb基因用于3种鳕鱼的特异性检测。研究表明,12S rDNA LAMP体系能够有效区分鳕科与非鳕科物种,而且3种鳕鱼物种特异性LAMP体系也具有良好的性能。在物种特异性LAMP体系中,大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼和黑线鳕的绝对检出限(LODa)分别为285,37和197 pg/μL,相对检出限(LODr)分别达到1%,0.1%和1%。在12S rDNA LAMP体系中,3种鳕鱼的绝对检出限分别为28.5,37和19.7 pg/μL,相对检出限均达到0.1%。在市售鳕鱼样品的检测中,两种LAMP检测法同样适用于鳕鱼和鳕鱼深加工产品的种类检测,为未来鳕鱼市场的规范与管理提供了快速有效的物种鉴定技术。3.利用AuNPs和特异性探针建立了一种快速检测鳕科物种的裸眼检测体系。选择12S rDNA基因设计特异性探针,用于区分鳕科和非鳕科物种。以鳕科中大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼和黑线鳕3种鳕鱼作为目标物种,对12S rDNA-probe-AuNPs反应体系进行优化。结果表明,所建立的12S rDNA-probe-AuNPs检测体系具有较高的特异性。对大西洋鳕鱼、太平洋鳕鱼和黑线鳕的检出限分别为2.2,3.15和2.65 ng/μL。20种市售鳕鱼样品在12S rDNA-probe-AuNPs体系中的检测结果与常规PCR检测一致,说明AuNPs检测体系的灵敏度能够满足市售鳕鱼产品的检测要求。此外,整个反应过程及结果观察能在30 min内完成,可以为鳕鱼类产品的现场快速种类鉴定提供一种新的方法。