【摘 要】
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该实验根据CAV-SJ1的DNA核到序列,设计并合成了一对特异性扩增凋亡素基因的引物,以CAV-1.5pUC119重组质粒为模板进行PCR,将扩增的DNA片断平端克隆至pUC119 Smal位点上,采用Ba
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该实验根据CAV-SJ1的DNA核到序列,设计并合成了一对特异性扩增凋亡素基因的引物,以CAV-1.5pUC119重组质粒为模板进行PCR,将扩增的DNA片断平端克隆至pUC119 Smal位点上,采用BamHI、KpmI双酶切获取凋亡素基因片断,然后将其粘端克隆至pCDNA3真核表达载体上.构成pCDNA3-VP3重组真核表达质粒.经测序表明该质粒含有凋亡素基因共有363bp,说明凋亡基因真核表达质粒构建成功.另外该实验将真核重组质粒pCDNA3-YP<,3>转染到人的喉癌细胞Hep-2及白血病细胞HL-60中,诱导了肿瘤细胞的显著凋亡.在光镜及电镜下均可观察到明显的细胞形态改变及凋亡小体.DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯形条带.流式细胞仪检测在DNA直方图上显示出凋亡峰,细胞凋亡百分率在转染72小时后达高峰,喉癌细胞Hep-2的凋亡百分率最高达81.12%,白血病细胞HL-60的凋亡百分率最高达44.85%.上述结果表明凋亡素具有一定的溶瘤作用,为肿瘤的基因治疗提供了实验依据.
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