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本试验的主要目的是评价两种冷冻保护剂 EDS(乙二醇、二甲基亚砜、蔗糖和 TCM199的混合液)EPS(乙二醇、1,2-丙二醇、蔗糖和 TCM199的混合液)、CB(细胞松弛素B)和离心极化处理对猪卵母细胞冻融后存活及发育能力的影响。试验分别应用EDS和EPS两种冷冻保护剂、CB(对照组和5.0、7.5及10.0μg/mL三个处理组)、离心极化处理对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻保存,应用台盼蓝染色法和Hochest33342染色法分析冻融后的猪卵母细胞存活率及随后的成熟率。试验结果如下: 1、用EPS和EDS作为冷冻保护剂,冷冻猪GV期COCs,冻融后EPS处理组的存活率(30.7%)高于EDS处理组(28.7%),但差异不显著(P>0.05)。EPS处理组的成熟率(15.1%)也高于EDS处理组(14.6%),但差异也不显著(P>0.05)。 2、用EPS作为冷冻保护剂,分别处理猪GV期COCs和裸卵,冻融后裸卵的存活率(31.1%)显著高于 COCs的存活率(29.6%),(P<0.05)。裸卵的成熟率(15.4%)高于COCs的成熟率(14.5%),但差异不显著(P>0.05)。 3、用不同浓度的CB处理猪GV期裸卵,冻融后7.5μg/mL处理组的猪GV期裸卵存活率(33.1%)显著高于对照组的存活率(30.0%),(P<0.05),但与5.0μg/mL处理组(31.7%)和10.0μg/mL处理组(32.1%)相比,差异不显著(P>0.05)。对照组的存活率与5.0μg/mL处理组和10.0μg/mL处理组相比,差异也不显著(P>0.05)。四个处理组间的成熟率差异均不显著(P>0.05)。 4、猪 GV期裸卵经7.5μg/mL CB和离心极化双重处理,冻融后其存活率(36.2%)高于 CB单处理组(32.8%)和对照组(30.1%),且三组间差异均显著(P<0.05)。其成熟率(21.4%)也显著高于CB单处理组(18.2%)和对照组(16.3%),(P<0.05),但CB单处理组和对照组相比,成熟率差异不显著(P>0.05)。 5、猪GV期卵母细胞经体外成熟培养44~48h获得MП期卵母细胞。用EPS和EDS作为冷冻保护剂,冷冻猪MП期卵母细胞,EPS作为冷冻保护剂,冻融后猪卵母细胞的存活率(30.1%)高于EDS处理组(29.0%),但差异不显著(P>0.05)。 6、用不同浓度CB处理猪MП期卵母细胞,冻融后7.5μg/mL处理组的猪MП期卵母细胞存活率(34.0%)显著高于对照组(28.2%)的存活率(P<0.05),但与5.0μg/mL处理组(31.3%)和10.0μg/mL处理组(32.5%)相比,差异不显著(P>0.05)。对照组的存活率与5.0μg/mL处理组、10.0μg/mL处理组相比,差异也不显著(P>0.05)。 7、猪MП期卵母细胞经7.5μg/mLCB和离心极化双重处理,冻融后其存活率(37.7%)高于 CB单处理组(33.0%)和对照组(28.4%),且三个处理组间差异均显著(P<0.05)。 8、猪GV期裸卵和MП期卵母细胞分别经7.5μg/mLCB和离心极化双重处理,冻融后猪 MП期卵母细胞的存活率(37.5%)高于猪 GV期卵母细胞的存活率(36.8%),但差异不显著(P>0.05)。