本研究以大白菜核基因雄性不育“两用系”AB01的不育株与大白菜自交系Chiifu（多国芸薹属基因组测序计划的模式植物）杂交、回交所构建的BC₁群体为试材，进行AFLP和SSR分析，获得了多个与大白菜核不育复等位基因Ms连锁的AFLP和SSR标记，并将位于目标基因两侧，遗传距离最近的2个AFLP标记转化为SCAR标记，构建了Ms基因区域的SCAR及SSR标记遗传连锁图谱，从而对不育基因位点进行了染色体定位。此外，通过对AB01进行SSR分析，使我们获得了1个与育性恢复基因Ms^f连锁的SSR标记，并对雄性不育基因Ms与其恢复基因间Ms^f的等位性关系进行了探讨。主要试验结果如下。1．用已知基因型的4份材料对大白菜自交系Chiifu进行测交，基于后代育性分离比率，鉴定出Chiifu在核不育位点上的基因型为msms。以甲型“两用系”AB01不育株为母本，与Chiifu杂交，构建BC₁分离群体，共244株，其中可育114株，不育130株，经χ²测验符合1：1分离比率，适合用于分子标记分析。2．以BC₁群体为试材，采用AFLP+BSA的方法，对256对PstI+GNN／MseI+CNN引物组合进行多态性筛选。在亲本及基因池间的引物筛选中，检测出16个与核不育基因Ms连锁的候选标记。经个体验证，筛选出6个与Ms基因紧密连锁的AFLP标记。将标记在群体中的分布数据输入MAPMAKER／EXP 3．0，构建了目标基因区域的AFLP图谱。该图谱覆盖了15 cM区域，标记P01和P04位于目标基因两侧，遗传距离分别为2．5和3．8 cM。其余标记P10，P12，P07和P11均位于P04一侧，与Ms基因间的遗传距离分别为6．3，10，12．5和12．5 cM。3．将位于不育基因Ms两侧的两个AFLP标记P01和P04的特异条带回收、克隆、测序，根据所获得的序列重新设计引物，成功的转化出位于Ms基因两侧的SCAR标记，并命名为syau_scr01和syau_scr04。如果共同使用这两个标记，理论选择正确率几乎可以达到100％，可用于大白菜核不育复等位基因Ms的分子标记辅助选择。4．以构建BC₁群体的双亲为试材，优化SSR反应体系。优化后的SSR反应体系为：1×buffer(10 mmol·L^-1 Tris-HCL，50 mmol·L^-1 KCL)，2 ng·μl^-1模板DNA，1U Taq DNA聚合酶，0．35 mmol·L^-1 dNTPs，0．4μmol·L^-1引物，2 mmol·L^-1Mg²⁺，最后加超纯水定容至20μl。以上述SSR反应体系为基础，利用BC₁分离群体，对Ms基因进行了SSR分析。首先，在双亲间对多国芸薹属基因组测序项目（BrGSP）开发的286对SSR引物进行了多态性筛选，其中182对在双亲间扩增出多态性条带，多态性引物比例高达68％。经过在基因池及单株上验证，筛选出3个与Ms基因紧密连锁的SSR标记，分别为cnu_m273，cnu_m030和cnu_m295。这3个标记均来自大白菜A07连锁群。为了开发出遗传距离更近的SSR标记，在A07连锁群上特定区域内的7个BAC克隆上，设计并开发了14对SSR引物，又筛选出一个与Ms基因紧密连锁的SSR标记syau_m13。经连锁遗传分析，构建了Ms基因区域的SCAR及SSR标记连锁图谱。该图谱覆盖9 cM区域，2个SCAR标记（syau_scr01和syau_scr04）位于Ms基因两侧，遗传距离分别为0．8和2．5 cM，4个SSR标记（syau_m13、cnu_m273、cnu_m030和cnu_m295）位于syau_scr04一侧，遗传距离分别为3．3，6．2，7．8和8．6 cM。根据BrGSP构建的大白菜A07连锁群的遗传连锁图上，syau_m13位于该连锁群26．9 cM处。据此，将大白菜核不育复等位基因Ms定位于A07连锁群的26．9 cM附近的3．3 cM范围内。5．以可育株与不育株1：1分离的大白菜雄性不育“两用系”AB01为群体，在可育池（Ms^fMs）与不育池（MsMs）间，对位于A07上的54对SSR引物进行多态性筛选。经过单株验证，获得了1个与育性恢复基因Ms^f连锁的SSR标记pbc_mENA6a。该标记与Ms^f基因间的遗传距离为7．8 cM。将Ms基因区域的SCAR和SSR标记图谱及Ms^f基因区域的SSR图谱，与BrGSP构建的大白菜A07连锁群遗传图谱进行比对，证明了Ms^f和Ms基因均位于A07连锁群0-26．9 cM范围内，对二者间的等位性关系进行了初步的探讨。该结果为进一步揭示该位点的分子机制奠定了基础。