目的转铁蛋白受体(Transferrin Receptor,TfR,CD71)介导细胞对铁的吸收,对细胞增殖具有重要意义。生理情况下,TfR在细胞表面低表达,而肿瘤细胞铁代谢发生改变,对铁的摄入增加,故TfR表达水平大幅上调。本研究旨在构建并生产出靶向TfR的双特异性抗体,并通过体外细胞系实验与临床样本实验,验证其活化T细胞并靶向杀伤肿瘤细胞的作用,为TfR作为肿瘤治疗靶点奠定基础。方法1.构建表达载体Single-TfR-CD3-His并转染DG44细胞,挑选出蛋白表达量较高的细胞株大规模培养,用镍离子亲和层析法纯化出目的抗体并鉴定。2.体外细胞系实验流式检测TfR-BiTE介导T细胞对多种不同细胞来源的血液肿瘤细胞的杀伤情况。3.收集临床白血病患者血样,并检测肿瘤细胞TfR表达水平,流式检测TfR-BiTE介导T细胞对原代白血病细胞的杀伤效果。结果1.纯化出TfR-BiTE共约0.8ml,浓度为2.17mg/ml,抗体分子量约55kDa。2.血液肿瘤均高表达TfR,TfR-BiTE介导T细胞对血液各肿瘤细胞系均有不错的杀伤效果:对AML细胞系KG-1a最大杀伤率达到约40%,对淋巴细胞来源的肿瘤细胞系(MOLT-4和U266)的最大杀伤率超过80%。将效应细胞改为活化的T细胞,可以在低效靶比、低抗体浓度的情况下取得明显杀伤效果。3.临床白血病患者肿瘤细胞TfR表达情况个体差异较大,阳性率从12.1%-81.7%不等。TfR-BiTE介导T细胞对AML患者肿瘤细胞的杀伤效果不甚理想,但是对B-ALL达到80%的杀伤率。结论体外细胞系实验与临床样本实验证实本实验室设计并产出的TfR-BiTE能活化T细胞并对血液肿瘤细胞起到杀伤效果。如能解决抗体产能、纯度与亲和力等问题,TfR-BiTE有应用于临床肿瘤免疫治疗的潜能。