复合诱变出芽短梗霉选育普鲁兰高产菌株

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出芽短梗霉(Aureobiasidium pullulans)又称为“出芽茁霉”、“黑酵母”及“短梗霉”等,是类酵母真菌,它归属于半知菌门(Deuteromycota)、丛梗孢目(Moniliales)、短梗霉菌属(Aureobasidium),具有酵母样和真菌菌丝体两种形态。出芽短梗霉能产生很多种代谢产物,比如胞外多聚糖、酶类、抗菌素等,而出芽短梗孢糖又称为普鲁兰(Pullulan)在国内外有关胞外多糖的研究较多。普鲁兰,其分子由麦芽三糖α-1,6-糖苷键连接而成。该糖无色、无味,对人体无任何毒副作用,具有优良的水溶性、成膜性等独特的化学和生物学特性,广泛应用于医药、食品、化妆品、烟草和农业等领域,是具有较大经济价值和开发潜力的多功能生物产品。本文以华中科技大学提供的出芽短梗霉A312为研究材料,通过紫外线诱变、亚硝酸诱变,筛选得到有产量有一定提高的菌株后,再采用离子束注入诱变处理上一步中得到的产量提高的菌株,从中筛选高产菌株。筛选方法为,将经过紫外、亚硝酸以及离子束处理得到的诱变子接种到5m1液体蔗糖培养基中在28℃,200rpm培养70h,加入双倍体积的无水乙醇观察培养基中多糖的产量。再将筛到的产量提高的诱变子接种到50ml的液体培养中做复筛,确定产量提高的突变子。经过近一年半的时间,紫外诱变筛选2600株、亚硝酸诱变800株、紫外-亚硝酸复合诱变筛选800株,离子束注入诱变筛选700株,最终得到了5株普鲁兰糖产量相对于出发菌株A312分别提高了7.8%、4.5%、33.7%、39.2%、15%的菌株。
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