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[目 的]研究N6-甲基嘌呤(m6A)甲基转移酶METTL3在前列腺癌中的表达情况及其临床意义;采用小干扰RNA(siRNA)沉默METTL3基因来观察其对前列腺癌细胞增殖、侵袭和克隆能力的影响,并进一步探索其在前列腺癌中可能发挥的分子作用机制,为前列腺癌的诊疗提供新的理论依据。[方 法]1.采用TCGA数据集资料分析METTL3 mRNA在前列腺癌和癌旁组织中的表达差异,采用蛋白印迹法(Western Blot)和免疫组化学法(IHC)检测METTL3蛋白在前列腺癌和癌旁组织中的表达差异。2.运用spearman等级相关性分析METTL3 mRNA和蛋白的表达水平与前列腺癌临床病理资料的相关性。3.设计、合成并筛选针对METTL3基因的siRNA靶向沉默METTL3基因;将前列腺癌DU145、PC-3细胞随机分组为空白对照组、Mock组、阴性对照组、实验组进行实验,细胞转染后进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR),Western Blot分别检测METTL3 mRNA和蛋白的表达水平验证干扰效率。4.分别采用CCK-8实验、Transwell小室实验、平板克隆形成实验检测各组细胞增殖、侵袭、克隆能力。5.瓶胞转染后使用斑点杂交实验(Dot blot)检测细胞RNA总体m6A水平的变化情况,使用Western Blot检测前列腺癌相关肿瘤蛋白Bcl-2、c-Myc、EGFR的表达情况。[结 果]1.TCGA数据集资料分析显示,前列腺癌组织中METTL3 mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.01);METTL3 mRNA表达水平与Gleason评分呈正相关关系(p<0.01),而与年龄、T分期、N分期无显著相关关系(P>0.05)。2.IHC检测发现前列腺癌和癌旁良性组织的细胞核和细胞质中均见到METTL3蛋白阳性表达,并且以细胞核为主;IHC、Western Blot实验均表明,与癌旁组织比较,前列腺癌组织中METTL3蛋白表达显著上调(P<0.01);METTL3蛋白表达水平与PSA值和Gleason评分呈正相关关系(PPSA<0.01,PGleason<0.05),METTL3蛋白的表达水平同样与年龄、T分期、N分期无显著相关关系(P>0.05)。3.细胞转染48 h后,RT-PCR结果显示,与空白组、阴性对照组比较,DU145、PC-3细胞实验组siRNA-1400片段对METTL3 mRNA干扰效率分别为90%、91%和 72%、73%(P均<0.01);Western Blot 结果表明,DU145、PC-3细胞实验组中siRNA-1400片段对METTL3蛋白干扰效率分别87.2%、85.7%和97.8%、97.7%(P均<0.01),结果与RT-PCR相符,实验组siRNA-1400干扰片段成功下调METTL3基因表达。4.CCK-8实验显示,DU145、PC-3细胞实验组各时间点OD值均显著低于空白和阴性对照组(P均<0.01);Transwell小室实验显示,DU145、PC-3细胞实验组穿过Matrigel基膜细胞数明显低于空白对照和阴性对照组(P均<0.01);平板克隆形成实验显示,DU145、PC-3细胞中同空白对照组、阴性对照组比较,实验组细胞克隆数明显降低(PSI45<0.01,PPC-3<0.05);以上结果表明,下调METTL3基因显著的抑制了 DU145、PC-3细胞的增殖、侵袭、克隆形成能力。5.Dot blot实验显示,DU145、PC-3细胞转染48 h后实验组细胞RNA的总体m6A水平较空白对照组和阴性对照组显著降低(P均<0.01),说明抑制METTL3基因表达将下调细胞RNA的总体m6A修饰水平;Western Blot实验显示,DU145、PC-3细胞实验组Bcl-2、c-Myc、EGFR蛋白的表达均显著低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.01),提示下调METTL3基因后将明显抑制Bcl-2、c-Myc、EGFR蛋白的表达。[结 论]1.METTL3蛋白在前列腺癌以及癌旁良性组织的细胞质、细胞核中均有表达,以细胞核表达为主,并且METTL3 mRNA和蛋白在前列腺癌组织中的表达均显著上调。2.METTL3的表达水平与Gleason评分、PSA值呈正相关关系,高表达的METTL3可能抑制了前列腺癌的组织分化,并且可能具有与PSA联合作为前列腺癌诊断标记物的价值。3.前列腺癌中高表达的METTL3可能通过依赖m6A修饰途径或独立于甲基转移酶活性促进肿瘤基因Bcl-2、c-Myc、EGFR的表达,提升肿瘤细胞的增殖、侵袭、克隆能力,并可能是前列腺癌的一个潜在治疗靶点。