S irtuins家族是保守的从古细菌到哺乳动物都存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）依赖型的组蛋白去乙酰化酶,也被称为“长寿蛋白”,对丝状真菌的生长发育和次级代谢等生命活动具有重要的调控作用。前期研究发现该家族蛋白MrSir2对我国传统药食同源微生物——红曲菌的生长、次级代谢具有调控作用。红曲菌基因组中有8个预测的Sirtuins家族蛋白,这些蛋白在红曲菌中分别具有什么样的功能,是否存在相互作用,并不清楚。本研究以两个具有典型SIR2结构域的Sirtuins家族蛋白MrSir2A和MrSir2B为研究对象,首先进行大肠杆菌异源表达,体外验证其酶活性。然后在前期得到Δmrsir2A菌株的基础上,构建Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B菌株,比较Δmrsir2A、Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B菌株在生长、形态及色素与桔霉素生产方面的异同点,研究其对红曲菌发育和次级代谢产物产生的调控作用以及可能存在的相互作用。主要结果如下;1.MrSir2A和MrSir2B蛋白的原核表达及酶活性分析利用RACE技术获得mrsir2B基因的cDNA全长序列并进行分析,PCR扩增mrsir2A和mrsir2B基因的CDS序列,将其与pET系列载体连接,转入大肠杆菌BL21（DE3）中。添加终浓度为0.25 mM的IPTG在16℃诱导培养16h时,Mrsir2A的可溶性蛋白浓度最高,Western blot证明表达蛋白正确,酶活性为78.5（OD/min/mg）;mrsir2B基因与pET-30a载体连接,在16℃诱导16 h得到微量可溶性蛋白。2.Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B菌株构建及目标菌株筛选利用Double-joint PCR的方法构建mrsir2B基因的敲除盒,以pCAMBIA3300质粒为载体构建mrsir2B基因的敲除载体,通过根癌农杆菌介导转化法（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）将其分别导入到红曲菌M7和Δmrsir2A菌株中。经PCR和Southern blot杂交验证,成功构建Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B突变株,作为后续实验的研究材料。3.MrSir2A和MrSir2B蛋白对红色红曲菌生长和次级代谢产物产生的影响（1）四株菌株菌体生长特征比较分析将红曲菌 M7、Δmrsir2A、Δmrsir2B和和Δmrsir2AΔmrsir2B接种至 PDA,CYA,G25N和MA培养基上,28℃培养10 d,观察菌落生长和形态变化。在PDA培养基上,Δmrsir2AΔmrsir2B菌落直径偏大;在CYA培养基上,Δmrsir2B菌落表面长出白色菌丝,表明其生长更快;在G25N培养基上,M7的菌落中心发红,3株突变株菌落中心偏白;在MA培养基上,Δmrsir2A和Δmrsir2B的菌落周围偏白,Δmrsir2A Δmrsir2B的菌落直径变大。3株突变株的生物量与M7相比没有明显差异。（2）四种菌株显微形态特征比较分析将红曲菌 M7、Δmrsir2A、Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B接种至 PDA,CYA,G25N和MA培养基上,28℃培养10 d,观察闭囊壳和分生孢子变化。在PDA培养基上,Δmrsir2A的闭囊壳变小,Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B的闭囊壳变得透明,边缘更加规整,孢子更易成串;在CYA和G25N培养基上,3种突变株的分生孢子数量增多;在MA培养基上,3株突变株的闭囊壳都更加规整,且Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B的孢子更易成串,与在PDA培养基上的结果一致。（3）四株菌株在液态发酵条件下桔霉素和色素产率的比较分析将红曲菌M7、Δmrsir2A、Δmrsir2B和Δmrsir2AΔmrsir2B接种至PDB培养基在28℃进行发酵培养,对发酵过程中主要代谢产物色素和桔霉素的产量进行分析。与M7相比,Δmrsir2A和Δmrsir2A Δmrsir2B的桔霉素产量显著降低,特别是在第11d,Δmrsir2A的桔霉素含量下降了约70%,Δmrsir2A Δmrsir2B的桔霉素含量下降了约58%,Δmrsir2B的桔霉素产量微低于M7。在生长前期,3株突变株的色素产量低于M7,第11 d高于M7。综上,mrsir2A和Δmrsir2B基因对红曲菌M7分生孢子和闭囊壳的发育有调控作用,影响桔霉素和色素的合成,MrSir2A和MrSir2B蛋白在桔霉素产生的调控方面可能存在互补性,在不同生长时期对红曲色素的合成影响不同。