水稻内生放线菌OsiRt-1对稻瘟病防治作用研究

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稻瘟病是水稻生产上威胁最大的病害之一,主要由真菌梨孢霉菌(Magnaporthe oryzae)感染引起。传统的化学防治稻瘟病具有破坏环境,危害人类健康等缺点,而培育水稻抗病品种难以跟上致病菌生理小种的变异速度而逐渐丧失抗性,因此,微生物农药以其低毒性和不受病原菌抗性影响的特点,越来越受关注。内生菌是可以在植物的整个或部分生长周期中稳定定殖的微生物菌群,与植物具有互利互惠的关系,近年来逐渐成为重要的生防制剂。本实验室在从生长11周的谷梅4号水稻根部分离并筛选到一株对稻瘟病有较强拮抗作用的内生放线菌OsiRt-1。为了进一步评定该菌的稻瘟病生防效果,初步探讨其作用机制,本论文主要开展了以下四个部分研究:1.采用传统的形态培养特征观察、生理生化测定以及16S rRNA序列分析,将菌株OsiRt-1鉴定为米修链霉菌(Streptomyces misionensis)。2.研究菌株OsiRt-1对稻瘟病菌的体外抗病作用。通过平板对峙实验,检测到OsiRt-1对供试稻瘟病菌生理小种RB3、Guy11、62、61、SO7均具有抗性,且对RB3,Guy11具有较强拮抗作用,拮抗距离均大于20mm;环境扫描电镜(SEM)对稻瘟病菌的形态结构观察发现,OsiRt-1处理过的稻瘟病菌RB3菌丝出现了如细胞壁皱缩、细胞膨胀等一系列畸形变化,表明OsiRt-1可以抑制稻瘟病菌RB3菌丝生长;通过研究不同天数的OsiRt-1发酵滤液对抑菌活性影响,发现其抑菌效果随着培养时间的增加而增强,当菌株在第六天生长量达最大时,其发酵滤液的抑菌率可达到28.06%。3.通过定性检测实验发现OsiRt-1具有可能降解真菌细胞壁的纤维素酶、蛋白酶活性,同时可产生植物生长促进剂铁载体、IAA、ACC脱氨酶。通过PCR检测,发现菌株OsiRt-1呈现聚酮合酶基因(PKSⅡ型)和非核糖体多肽合成酶基因(NRPS)阳性。4.研究OsiRt-1在大田条件下对稻瘟病抗病作用。在水稻生长至第10、20天喷洒OsiRt-1孢子液,与空白组苗瘟病情指数(46.75%)相比,处理组苗瘟病情指数降低了7.76%。在水稻生长至第50、80天喷洒OsiRt-1孢子液,处理组的病情指数56.67%明显低于空白组76.22%,同时,与空白组种子损失率(44.61%)相比,处理组的种子损失率降低了17.46%。抗病结果显示,OsiRt-1对穗瘟的防治效果明显优于苗瘟。苗期和抽穗期重分离结果显示,OsiRt-1处理过的水稻地上部分,其分离的OsiRt-1占内生放线菌的比例(81.08%,33.33%),明显高于未处理水稻(33.33%,0.00%)。本论文初步探讨了OsiRt-1对稻瘟病菌的抑制作用,为放线菌的生物防治提供了基础;通过分析其与生防相关的次级代谢产物,为进一步深入了解该放线菌抗病机制奠定了理论基础;通过针对OsiRt-1在大田复杂条件下的控病效果研究,为微生物新农药的开发利用提供依据:本论文的重点是从一种新的资源内生菌中挖掘了一株生防菌株OsiRt-1,在水稻稻瘟病防治的农业应用上,具有较好的开发潜力。
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