脂肪干细胞来源的生长因子对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的影响

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背景:脂肪干细胞条件培养液(adipose stem cell-conditioned medium,ASC-CM)中富含各类脂肪干细胞(adipose stem cells,ASCs)来源的细胞因子。目前研究证实,ASC-CM可以促进皮肤创伤修复,皮肤成纤维细胞是一类几乎参与整个创伤修复过程的重要效应细胞,其迁移与增殖是创伤修复首要的关键环节。目的:研究ASC-CM中表皮生长因子(EGF),血小板源性生长因子(PDGF),血管内皮生长因子(VEGF),成纤维细胞生长因子(bFGF)在创伤愈合过程中对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的作用机制。方法:(1)采用蛋白芯片技术,检测ASC-CM中包括EGF、PDGF、VEGF以及bFGF在内的507种细胞因子的含量(信号值,SV);(2)采用划痕实验和transwell小室迁移实验,在ASC-CM中分别加入0、1、10、20、50、100ng/ml浓度的EGF、PDGF、VEGF和bFGF,上述各因子的中和抗体,及上述单一因子诱导皮肤成纤维细胞迁移24h后,检测其迁移率;(3)采用CCK-8实验,诱导皮肤成纤维细胞增殖3d后,检测其增殖率,分组同上。结果:(1)ASC-CM中EGF(SV=458.0)、PDGF(SV=363.5)、VEGF(SV=360.5)、以及bFGF(SV=389.5)信号值均大于300;(2)相较于单一因子,ASC-CM对成纤维细胞的迁移有明显的促进作用。其中,PDGF、VEGF和bFGF对细胞迁移的促进作用显著,且随着浓度的上升而增加,PDGF在50ng/ml时、VEGF在20ng/ml时、bFGF在20ng/ml时达到各自的平台期;在ASC-CM中分别加入PDGF、VEGF和bFGF的中和抗体后,促进作用可被明显抑制;(3)相较于单一因子,ASC-CM对成纤维细胞的增殖有明显的促进作用。其中,EGF和bFGF对细胞增殖的促进作用显著,且随着浓度的上升而增加,并分别在50ng/ml和20ng/ml时达到平台期;在ASC-CM中分别加入EGF和bFGF的中和抗体后,促进作用可被明显抑制。结论:相较于单一因子,ASC-CM可明显促进皮肤成纤维细胞的迁移和增殖,其中所含有的PDGF、VEGF和bFGF对细胞迁移促进作用非常明显,且具有浓度依赖性;EGF和bFGF对细胞增殖促进作用非常明显,且具有浓度依赖性。因此ASC-CM对皮肤创伤修复的促进作用优于单一因子;同时,在应用ASC-CM时应注意选择适宜的细胞因子浓度,可更有效地促进成纤维细胞的迁移和增殖。
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