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体细胞克隆技术已被广泛应用于畜牧、生命科学和医学等领域,是当今生产转基因动物最常用的方法。在利用该法生产转基因动物过程中,G418常用于筛选转基因供体细胞,但G418处理供体细胞后对其克隆胚胎发育效率的影响目前仍不清楚。为了探索G418处理供体细胞对其克隆胚胎发育效率的影响,从而为将来优化体细胞克隆法制备转基因动物技术提供基础,本实验利用G418单独处理猪成体成纤维细胞,比较处理前后细胞中抗氧化应激、细胞凋亡、DNA甲基化酶相关基因的表达水平,基因组重复序列(LINE-1、微卫星)、XIST基因、Bax基因的DNA甲基化水平,以及其核移植胚胎体外发育的能力。实验取得以下结果:(1)G418处理能够显著抑制猪成体成纤维细胞的增殖,导致部分细胞的死亡,存活的细胞形态发生改变,G0/G1期细胞的比例显著提高(P<0.05)。(2)G418处理能够显著提高猪成体成纤维细胞中抑制凋亡基因的表达量,改变氧化应激相关基因在mRNA水平上的表达。(3)G418处理猪成体成纤维细胞能够显著影响Dnmt1和Dnmt3a基因的表达(P<0.05),但并不影响细胞中LINE-1、微卫星、XIST基因及Bax基因的DNA甲基化水平(P>0.05)。(4)利用刚经G418处理后的猪成体成纤维细胞作为核供体进行核移植,其融合率、卵裂率及囊胚率均极显著低于对照组(P<0.05),但对囊胚内平均细胞数没有影响(P>0.05)。(5)利用G418处理后经恢复培养传代的细胞作为核供体进行核移植,能够显著提高囊胚率(P<0.05),但不影响融合率、卵裂率及囊胚内平均细胞数(P>0.05)。以上结果表明,利用刚经G418处理的细胞作供体细胞进行核移植,获得的克隆胚胎发育效率有所下降,其原因可能是G418在供体细胞中未代谢完毕,对供体细胞及其核移植胚胎有毒性作用。但使用G418处理后经恢复培养传代的细胞作供体进行核移植,能够显著提高克隆胚胎发育效率,其原因可能是G418处理能够筛选出抗凋亡力强的细胞作为核供体,提高克隆胚胎的抗凋亡能力,从而促进克隆胚胎的发育。