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氟苯尼考(Florfenicol,FF)是一种新型的氯霉素类广谱抗生素,由于其优异的抗菌效果和较小的毒副作用,已广泛应用于动物养殖业中。然而FF在动物组织中的残留会严重危害消费者的健康,因此有必要建立FF残留检测方法并对其残留消除规律进行研究成为食品安全亟待解决的问题。本文旨在建立动物可食性组织中FF及其代谢物残留检测的高效液相色谱(HPLC)检测方法和气相色谱(GC)检测方法,并利用这些方法对猪、鸡组织中FF及其代谢物残留消除规律进行研究,从而为制定合理的休药期和临床用药提供可靠的依据。
本文建立了猪肌肉、脂肪、肝脏和肾脏等组织中FF和其主要代谢物氟苯尼考胺(Florfenicolamine,FFa)的HPLC检测方法。组织样品采用水、丙酮和乙腈提取,提取液蒸干,复溶,用MCXSPE柱净化,HPLC测定。在0.05、0.5和2.0μg/g的添加水平,上述各组织中FFa和FF的回收率分别在69.5%-88.8%和75.2%-89.8%之间,变异系数分别在1.2%-9.9%和1.6%-9.2%之间。检测限分别为10、15μg/kg,定量限分别为35、50μg/kg。能够满足对FFa和FF残留检测的要求。
本文建立了猪尿中FF和FFa残留检测的HPLC检测方法。猪尿样品用等量水稀释,然后用2%氨水-乙酸乙酯萃取两次,正己烷脱脂,用MCX SPE柱净化,HPLC测定。在0.1、0.5和5.0μg/mL添加水平,猪尿中FF和FFa的回收率范围在68.5%-91.8%之间,变异系数在1.9%-9.6%之间,检测限为0.05μg/mL,定量限为0.10μg/mL,能够满足对FFa和FF残留检测的要求。
用上述建立的检测方法进行了猪体内FF和FFa残留消除规律的研究。给40头试验猪间隔24小时连续2次肌肉注射20mg/kg体重剂量的氟苯尼考注射液斤,在停药斤1、3、6、9、12、14、17和21天分别屠宰5头试验猪并取肌肉、注射部位肌肉、肝脏、肺脏、脂肪和肾脏,并测定这些组织中FFa和FF残留量。结果显示在试验期间,除注射部位外,肝脏中FF残留量最低而FFa含量最高,肾脏中FF和FFa总含量最高,表明肝脏和肾脏是FF的靶器官。除注射部位外,到停药后8天,所有组织中FF和FFa总含量低于中华人民共和国农业部和欧盟规定的最高残留限量(MRLs)。
本文建立了鸡肌肉、肝脏组织中FF和FFa的气相色谱(GC)检测方法。组织样品用2%氨水-乙酸乙酯提取,MCX SPE柱净化,GC测定,在10、20和100ng/g的添加水平,各组织中FF和FFa的回收率在78.3%-99.8%之间,变异系数在2.9%-9.3%之间,检测限为1.2-3.0ng/g,定量限为3.9-10.0 ng/g。能够满足残留检测的需要。同时本文还用本方法进行了鸡组织中FF和FFa残留消除规律的研究。给肉鸡以100mg/L水的剂量连续饮用5天氟苯尼考后,在停药后1、3、4、5、7、9和12天随机屠宰5只,摘取肌肉和肝脏等组织用上述GC方法测定。结果显示肝脏中FF和FFa含量均较高,肝脏为FF的靶器官,到停药后6天,所有组织中FF和FFa总残留量低于中华人民共和国农业部和欧盟规定的最高残留限量(MRLs)。