柠檬醛—阿糖胞苷联用抗白血病HL-60细胞株初步研究

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目的:柠檬醛是中药山苍子果实精油的主要组成及功效单体,具有多种生物学功能,长期使用无遗传风险。近年国内外研究发现它对多种白血病细胞株有显著抑制作用,不仅靶向性强,而且对正常细胞无损伤。阿糖胞苷是治疗急性髓细胞白血病最常用的临床药物之一,但随药物使用量增加细胞毒性增强和敏感性降低的弊端直接制约它在临床上的应用,因此,吸引人们从植物源天然产物中寻找既能降低阿糖胞苷毒性又能提高白血病细胞对其敏感性的辅助药物。本学位论文通过研究柠檬醛与阿糖胞苷联用对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60在增殖与凋亡、细胞膜组成结构与功能、细胞显微与超显微形态结构等方面的影响,揭示柠檬醛-阿糖胞苷抗HL-60细胞的生物活性,了解柠檬醛-阿糖胞苷联合作用的类型,并对联合作用机理进行初步探讨;此外还从人红细胞角度评价了柠檬醛-阿糖胞苷使用安全性,为柠檬醛与阿糖胞苷联用在急性白血病临床治疗上的应用提供理论依据。方法:MTT法检测不同浓度柠檬醛、阿糖胞苷及其联用对HL-60细胞的生长抑制率,利用金氏公式计算Q值,并据此判别柠檬醛-阿糖胞苷联合作用类型;采用光镜、透射电镜及原子力显微镜(AFM)技术观察细胞外形、胞内超微结构及膜表观微形态;此外,还采用细胞凋亡检测的DAPI染色、膜脂筏组成的生化分析、膜形变功能的快速动态显微图像分析、膜表面负电荷(Zeta电位)的相分析电泳光散射技术及红细胞溶血率测定的分光光度技术等实验手段。结果:柠檬醛-阿糖胞苷对HL-60细胞具有生长抑制作用,在一定范围内呈剂量依赖性,Q氏值计算结果表明,二者联用的抑制效应属显著协同作用。与对照组相比,柠檬醛-阿糖胞苷处理的HL-60细胞表现出:膜表微区形态异变、附带颗粒减少,弹性参数Kc增大(表征细胞膜形变功能减弱),Zeta电位降低(反映细胞膜表面负电荷减少);核固缩、染色质边集、胞质空泡化、凋亡小体出现(反映细胞凋亡被诱导)。此外,红细胞对照实验表明柠檬醛-阿糖胞苷联用不引起红细胞溶血;脂筏干扰实验表明膜胆固醇水平维系与柠檬醛生长抑制活性关系密切。结论:柠檬醛能显著提高阿糖胞苷对HL-60生长抑制和凋亡诱导活性,柠檬醛-阿糖胞苷联用对外周血人红细胞没有溶血效应,表明了柠檬醛对阿糖胞苷治疗白血病具有强效增敏潜能。柠檬醛-阿糖胞苷联用抗HL-60机制涉及膜结构与功能损伤、胞质中线粒体等细胞器损伤、细胞核和DNA损伤。
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