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木薯(Manihot esculenta Crantz)是重要的热带经济作物,也是有潜力的能源物质。近些年木薯种植面积不断减少,其中虫害、草害仍然影响木薯的产量,其中草害是影响木薯优质高产的主要生物因素之一。因此,培育抗除草剂的木薯新品种是木薯产业的迫切需求。本研究将通过农杆菌介导法,以木薯愈伤组织为材料,将Bar基因转入华南8号木薯(SC8)中,并通过DNA、RNA、蛋白水平上的鉴定、抗除草剂的功能鉴定对转基因植株进行了研究,筛选出抗除草剂的转基因木薯株系,为木薯草害防控奠定基础。取得主要实验结果如下:(1)从田间消毒获得木薯SC8的组培苗,大批量扩繁获得足够的SC8腋芽来诱导愈伤组织。结果表明,在含有 0.25 mg/L,0.5 mg/L,1 mg/L,1.5 mg/L,2mg/L的2,4-D的MS培养基和含有12 mg/L的毒莠定的CIM培养基中,含有0.25 mg/L 2,4-D的MS培养基诱导愈伤组织的效率最好。但就玻璃化和褐化两个因素来说,CIM培养基比其他含有2,4-D的MS培养基的比率低。(2)通过农杆菌介导法转Bar基因到SC8的愈伤组织中,结果表明,当农杆菌侵染的OD值为0.8,转化后再生的MS培养基中含有0.75 mg/L的ZT时,出芽率与转化率较好,分别为60%和30%。(3)提取转基因植株的DNA,进行PCR检测,结果表明,在87株转基因植株中有12株阳性植株。(4)提取转基因植株的RNA,进行RT-PCR检测,结果表明,在12株阳性植株中有4株植株在转录水平上表达。(5)提取12株阳性转基因植株的蛋白,用含有GFP标签的抗体做Western Blotting检测GFP蛋白的表达,结果表明,在12株阳性转基因SC8植株中,有3株转基因植株中外源基因有效表达。(6)用不同浓度的草铵膦(Basta)进行筛选,对SC8的未转化的苗进行浓度筛选。用稀释 8000 倍(12.5 mg/L),稀释 4000 倍(25 mg/L),稀释 3000 倍(33.33 mg/L),稀释 2000 倍(50 mg/L),稀释 1500 倍(66.67 mg/L),稀释 1000 倍(100 mg/L),稀释500倍(200 mg/L)的浓度进行筛选。结果表明,木薯SC8的致死浓度为稀释500倍(200 mg/L)的Basta,半致死浓度为稀释1000倍(100 mg/L)的Basta。为得到更加精确的筛选浓度,再用稀释500倍(200 mg/L)、稀释 600 倍(166.67 mg/L)、稀释 700 倍(142.85 mg/L)、稀释 850 倍(117.65mg/L)、稀释1000倍(100 mg/L)Basta处理SC8组培苗,得出在稀释850倍的Basta时作为筛选浓度较佳。把3株有蛋白表达和1株无蛋白表达的转基因植株进行稀释850倍(117.65 mg/L)的Basta浓度筛选,结果表明3株有蛋白表达的转基因植株均对Basta有抗性。