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背景:细胞色素P3A4（CYP3A4）是机体内的一种重要药物代谢酶,介导了约50%以上的临床药物代谢。孕烷X受体（PXR）、组成型雄烷受体（CAR）与热休克蛋白90（HSP90）、视黄醛X受体（RXR）、类固醇受体共激活因子-1（SRC-1）、乙酰化转移酶P300等转录调控因子均参与了对靶基因CYP3A4的调控。然而目前关于CYP3A4的调控机制的研究多停留在PXR或CAR的单一核受体活化上,而对二者间的交互影响及其与复杂调控因子的交互作用关注甚少。课题组前期研究发现,人参炔三醇（PXT）可通过激活PXR促进CYP3A4表达,CAR高表达后该作用被拮抗;人参炔三醇通过促进细胞质中PXR与阻遏蛋白HSP90的解离、增强其与RXR的结合、促进PXR的核移位进而上调肝细胞CYP3A4表达。那么在细胞核内,SRC-1、P300等核调控因子及DNA反应元件（ER-6、DR-3等）是否及如何参与人参炔三醇对CYP3A4靶基因的调控作用?值得我们密切关注与深入探讨。目的:本课题采用蛋白免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀等方法,聚焦核受体PXR与CAR间的交互影响及其与核内调控因子SRC-1/P300、DNA反应元件ER-6/DR-3的交互作用,深入研究并探索人参炔三醇上调CYP3A4表达的分子学机制。方法:1、采用Hep G2细胞模型,通过蛋白免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、Western Blot、q PCR等技术,研究人参炔三醇对PXR、CAR与SRC-1、P300结合及其与靶基因CYP3A4反应元件结合的影响;以及沉默CAR后相关影响的变化。2、采用Huh-7细胞模型,采用蛋白免疫共沉淀、Western Blot等技术,进一步探究人参炔三醇对PXR、CAR与SRC-1、P300结合的影响;以及沉默CAR后相关影响的变化。结果:1、人参炔三醇对Hep G2细胞中PXR和CAR与SRC-1、P300及CYP3A4反应元件结合的影响在正常Hep G2细胞中,随着人参炔三醇浓度的上升（10～80μM）,PXR与核调控因子SRC-1、P300以及反应元件ER-6、DR-3的结合逐渐增强;而CAR仅在人参炔三醇高浓度80μM时,与SRC-1及反应元件ER-6和DR-3的结合分别显著上调了434.26%、252%和221%,其他浓度无明显影响,CAR与P300间未发现结合作用;沉默h CAR后,在人参炔三醇干预下,PXR与SRC-1及反应元件ER-6、DR-3的结合作用进一步增强。2、人参炔三醇对Huh-7细胞中PXR、CAR与SRC-1、P300相互结合的影响在正常Huh-7细胞中,随着人参炔三醇浓度的上升,PXR与SRC-1、P300的结合逐渐增强;在人参炔三醇80μM时,CAR与SRC-1的结合增强显著上调了157.98%,其他浓度无明显影响;沉默h CAR后,人参炔三醇干预下PXR与SRC-1的结合进一步增强。结论:1、在Hep G2及Huh-7细胞中,人参炔三醇能通过促进PXR对共激活因子SRC-1、P300的招募及其与DNA反应元件ER-6、DR-3的结合进而上调CYP3A4的表达;在高浓度80μM时,人参炔三醇也能通过促进CAR对SRC-1的招募及其与DNA反应元件的结合参与对CYP3A4的调控。2、人参炔三醇调控CYP3A4表达时,核受体PXR、CAR会基于共激活因子SRC-1及DNA反应元件ER-6、DR-3的竞争而产生交互抑制作用。