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目的:通过研究橙皮素、灯盏花乙素、地榆皂苷Ⅱ和虎杖苷四种中药单体对免疫应答的影响,从中初步筛选出激活免疫应答效果最好的一种中药单体—橙皮素作为佐剂研究对象。将橙皮素与灭活的B16F10黑色素瘤抗原联合应用于荷瘤小鼠体内,探讨其增强荷瘤小鼠机体免疫力的机制,为深入研究肿瘤免疫佐剂提供参考。方法:用橙皮素、灯盏花乙素、地榆皂苷Ⅱ和虎杖苷按照浓度梯度分别刺激RAW264.7和DC2.4细胞系,共同培养48 h后,通过流式细胞分析技术检测MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80和CD86的表达情况,从而探究不同中药单体对抗原递呈细胞的免疫激活效果。通过细胞实验筛选出橙皮素作为主要研究对象,用125μg/ml橙皮素与RAW264.7细胞系和DC2.4细胞系分别培养48 h后,提取细胞中的RNA和蛋白质用以分析橙皮素激活APC的信号通路。将125μg/ml橙皮素单独使用或者与灭活的黑色素瘤混合使用,经过体内和体外两部分实验检测其是否能刺激APC活化。体外实验将LPS设为阳性组,用流式细胞仪检测RAW264.7和DC2.4细胞系表面标志物MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80和CD86的表达情况;体内实验将灭活的黑色素瘤与弗氏完全佐剂混合制备的疫苗设为阳性组,将只含有灭活的黑色素瘤制备的疫苗以及灭活的黑色素瘤与橙皮素混合制备的疫苗设为实验组,只含有培养液的组设为阴性组,分别通过肌肉注射的方式免疫小鼠。取免疫后小鼠的脾细胞,用流式细胞仪分析MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80和CD86的表达情况,T细胞分泌的IL-4、IFN-γ、TNF-α的情况以及T细胞杀伤能力。结果:我们发现,橙皮素可以有效激活DC2.4细胞系和RAW264.7细胞系,使抗原递呈表面标志物MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80和CD86都有不同程度的提高。橙皮素可以激活抗原提呈细胞中PI3K-Akt通路,增强CD8+T细胞反应,刺激IL-4、IFN-γ和TNF-α的分泌;降低Treg细胞的活性,使Foxp3分泌减少。我们还观察到,灭活的黑色素瘤与橙皮素联合应用抑制了荷瘤小鼠肿瘤的生长,与只含有灭活的黑色素瘤的疫苗相比,整体生存率得到显著提高。为了验证CD8+T细胞在抑制黑色素瘤生长过程中的作用,从免疫后小鼠的脾脏中筛选出CD8+T细胞,通过小鼠的尾静脉回输到荷瘤小鼠的模型中,发现小鼠存活率明显提高。结论:橙皮素可以作为一种潜在的疫苗佐剂来改善机体抗肿瘤免疫反应和抗原的免疫原性,为新型疫苗佐剂的研究提供有价值的参考。