菠菜Y染色体重复序列的分离及染色体定位

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菠菜,苋科藜亚科菠菜属一年生或两年生草本植物,其性别决定方式为XY型,基因组约为989 Mbp,细胞学证据表明菠菜的1号染色体为性染色体并且Y染色体已经得到成功分离并进行了体外扩增。微分离的Y染色体的扩增产物为我们研究菠菜性染色体的结构与演化鉴定了基础。重复序列在其他雌雄异株模式植物,如番木瓜、白麦瓶草、酸模等性染色体演化中的作用已研究的比较透彻,然而重复序列在菠菜性染色体演化过程中的作用未见相关报道。研究表明微分离的单染色体DOP-PCR扩增产物会聚集许多重复序列,本研究在获得菠菜微分离Y染色体DOP-PCR扩增产物的基础上,利用消减杂交、斑点杂交等技术手段筛选性别差异表达的重复序列,并构建探针,分别与菠菜雌、雄株根尖有丝分裂中期染色体进行荧光原位杂交,观察信号在性染色体和常染色体上分布情况,探讨重复序列在菠菜性染色体演化中的作用。  本研究主要内容包括:⑴成功构建了菠菜单染色体消减杂交文库并进行了重组质粒的筛选。⑵成功的获得一个菠菜雄性特异重复序列SP74-1。⑶将获得的雄性特异或雌雄差异的片段SP73、SP74-1、SP74-3、SP75、SP76、SP77、SP78和SP79进行染色体定位,FISH结果显示SP73、SP75荧光信号在性染色体上强度要大于其在常染色体上的信号强度,荧光信号强度在X和Y染色体之间没有明显差别。雄性特异分子标记SP74-1和雌雄差异序列SP73、SP74-3、SP75、SP76、SP77、SP78和SP79均包含有部分Tyl-copia和Ty3-gypsy逆转录转座子序列,Tyl-copia类逆转录转座子和Ty3-gypsy逆转录转座子序列荧光信号均在性染色体上有分布,推测在菠菜性染色体的演化过程中存在着逆转录转座子的累积。
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