[目的]胃癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一,由于其起病隐匿,早期难以发现,晚期治疗效果差,严重威胁着人类健康。因此寻找有关胃癌早期诊断的新参考指标,提高诊治效果,是目前胃癌研究中至关重要的课题。人组织型激肽释放酶基因家族(KLKs)是近年新发现的与肿瘤相关的丝氨酸蛋白酶家族,KLK6基因是该家族成员之一,其编码的蛋白-人组织型激肽释放酶6(hK6)是由223个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶,具有胰蛋白酶样活性,与胃癌关系密切。本课题首先采用免疫组化SP法检测hK6在胃癌组织中的表达情况,并探讨hK6在胃癌组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。然后通过建立双抗体夹心ELISA方法检测胃癌患者血清中hK6的含量,探讨血清hK6作为胃癌肿瘤标记物临床应用的可行性。[方法]1、通过免疫组化SP法检测120例胃癌、45例胃溃疡和41例正常胃黏膜组织中hK6蛋白的表达情况,并进一步分析hK6的表达与胃癌患者的性别、年龄、原发肿瘤大小、组织分化程度、原发部位、浸润深度、临床分期、淋巴结转移等临床病理参数之间的关系,探讨其临床意义。2、建立定量测定人血清中hK6的双抗体夹心ELISA方法,优化ELISA方法的最佳条件,运用棋盘滴定法确定包被抗体和酶标记抗体的浓度,并用建立的ELISA方法检测146例不同临床分期胃癌患者、50例胃溃疡患者和46例健康体检者血清hK6的含量,并和CEA进行对比分析,探讨其作为胃癌血清肿瘤标记物临床应用的可行性。[结果]1、hK6主要表达于胃癌细胞的胞浆,在胃癌组织中阳性表达率为69.17%(83／120),在胃溃疡组织中的阳性表达率为31.11%(14／45),在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为19.51%(8／41),胃癌中hK6表达的阳性率高于胃溃疡及正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.01)。在胃溃疡与正常胃黏膜组织的表达差异无统计学意义(P>0.05)。随胃癌浸润深度的增加、TNM分期的升高及淋巴结的转移,hK6的表达逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。但hK6的表达与胃癌患者的性别、年龄、原发肿瘤大小、组织分化程度以及肿瘤的原发部位等无相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。2、双抗体夹心ELISA方法包被抗体的最适浓度为5λg/mL,酶标记抗体的最佳稀释比例为1：2000。成功建立了检测胃癌患者血清中hK6浓度的ELISA方法,血清检测结果显示,胃癌患者血清中hK6的含量为(5.32±1.65) ng/mL,并且在晚期胃癌中的含量要高于早期胃癌(P<0.05),胃溃疡组为(3.51±1.02) ng/mL,健康对照组为(3.11±0.64)ng/mL,胃癌组与胃溃疡组和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。胃溃疡组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。胃癌组hK6检测的阳性率为61.64%(90／146)高于CEA检测的阳性率41.10%(60／146),两者联合检测的阳性率76.71%(112／146)。[结论]免疫组化结果表明hK6与胃癌的发生发展密切相关,伴随其发展过程,这为胃癌的防治提供了新的思路。血清检测结果提示hK6是胃癌良好的血清肿瘤标记,建立的ELISA方法简便、快速,易于推广应用。