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[目的]从海洋生物Ⅰ号中提取,分离和纯化抗肿瘤活性成分,探讨海洋生物Ⅰ号提取物对人低分化鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的影响及作用机制。
[方法]海洋生物Ⅰ号经乙醇冷浸渍法提取,提取液经旋转蒸发浓缩得到乙醇粗提取物。石油醚,乙酸乙酯和水饱和正丁醇液液萃取法初步分离乙醇卡H提取物。MTT法检测各组分对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z的生长抑制作用,KM种小鼠预实验探索各组分在体内实验的最大耐受量(MTD),通过建立人低分化鼻咽癌裸鼠移植瘤模型来观察海洋生物Ⅰ号提取物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,使用RT-PCR和Western Blot检测移植瘤组织中波形蛋白(Vimentin)和上皮-钙黏蛋白(E-cadherin)基因和蛋白的表达。
[结果]新鲜的海洋生物Ⅰ号经乙醇冷浸渍法提取和系统溶剂液液萃取法分离得到石油醚提取物,乙酸乙酯提取物和水饱和正丁醇提取物。MTT检测结果显示三个组分对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z的生长均有不同程度的抑制作用,且呈时间一剂量依赖关系,乙酸乙酯提取物的活性最强,水饱和正丁醇提取物次之,石油醚提取物最低。动物预实验结果显示,石油醚提取物,乙酸乙酯提取物,水饱和正丁醇提取物对KM种小鼠的最大耐受量分别大于6.5g/kg,3.25g/kg,3.25g/kg,且无明显毒性。成功复制人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠实验结果表明,乙酸乙酯提取物对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长具有一定程度的抑制作用,低,中,高剂量的生长抑制率分别为21.94%,23.91%,32.96%,且对裸小鼠的体重和脾指数无明显影响。RT-PCR法和Western Blot法的结果表明,乙酸乙酯提取物能部分抑制移植瘤组织中Vimentin的表达,同时增强E-cadherin的表达。
[结论](1)海洋生物Ⅰ号提取物在体外能抑制人鼻咽癌细胞株CNE-2Z的生长,其抑制作用与浓度和作用时间正相关,三种提取物中,乙酸乙酯组分的活性最强,水饱和正丁醇组分次之,石油醚组分最低。(2)海洋生物Ⅰ号三种提取物组分对KM种小鼠的最大耐受量(MTD)分别大于6.5g/kg,3.25g/kg,3.25g/kg,且对KM种小鼠无明显毒性。(3)海洋生物Ⅰ号提取物乙酸乙酯组分对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长具有一定程度的抑制作用,且对Balb/C裸小鼠体重和脾指数无明显影响。(4)海洋生物Ⅰ号乙酸乙酯提取物组分能部分抑制移植瘤组织中Vimentin的表达,增强E-cadherin的表达,提示Vimentin和E-cadherin可能是其发挥抑制作用的潜在靶点。