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该研究分四个实验完成.实验一选用正在产蛋的罗曼鸡,取其排序第三(F<,3>)的卵泡,分离颗粒层细胞,用含血清培养基培养,并用含脂质体0.0μl/ 孔、0.6μl/孔、1.2μl/孔、2.4μl/孔和4.8μl/孔、 bcl-2基因重组质粒0.2μg/孔转染卵泡颗粒细胞.应用流式细胞术等方法分析转染基因后的原代细胞和传代细胞的生长与调亡情况.结果发现,与未转染组相比,转染后的传代细胞分裂速度较快(p<0.01 )、调亡比率较低,G<,2>/M+S期细胞显著高于对照(p<0.01),且与脂质体浓度有剂量依赖关系,在转染时间为12h、DNA含量为0.2ug/孔的条件下,脂质体最佳转染浓度为1.2ul/孔 .这些结果证明, bcl-2基因或脂质体具有促进细胞分裂、抑制细胞调亡、延长细胞寿命的作用.实验二选用排序第一(F<,1>)和第四(F<,4>)的卵泡,取其颗粒细胞.分别将来源于F<,1>和F<,4>卵泡的颗粒细胞分为对照.转空载体和转bcl-2毛重组质粒三组,以进一步证明bcl-2基因对于鸡卵泡颗粒细胞的作用.脂质体介导转染处理后在不完全无血清培养基(不添加胰岛素)中培养48h,流式细胞仪检测bcl- 2蛋白表达和放免检测1GF-1的分泌.结果发现,转染bc1-2重组质粒组的bc1-2蛋白表达量和1GF-1分泌量均多于其他各组.分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现F<,1> 细胞随时间的增加1GF-1分泌量减少,而F<,4>细胞随时间的增加,IGF-1分泌量基本不变.这些结果证明,①在鸡卵泡颗粒细胞中转染的bcl-2基因具有表达功能; ②bcl-2基因具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用.实验三选用来源于F<,1>、F<,2>和F<,3>卵泡的颗粒细胞,按1×l0<5> 胞/孔接种到24孔培养板内.24 h后,换无血清完全培养基.并在培养基中添加含量分别为0 IU/ml 、10 1U/ml、20IU/ml、40 IU/ml的SOD,并用MTT(四甲基偶氮唑盐)方法检测细胞生长情况,用放射免疫测定技术(RIA)检测培养基中孕酮和雌二醇的含量.结果发现,①SOD对来源于F<,2>卵泡颗粒细胞的生长有促进作用; ②SOD可以促进各发育阶段卵泡颗粒细胞的孕酮分泌功能.③SOD对来源F<,3>卵泡的颗粒细胞分泌雌二醇的功能有促进作用.实验四与实验三在方法学上的主要差别,是用含量分别为0、10<-8>、10<-7>、10<-6>、10<-5>mol/l的MLT代替SOD、添加到无血清培养基中培养鸡卵泡颗粒细胞.结果发现,①MLT对体外培养颗粒细胞的生长无明显影响;②MLT可以促进不同时期卵泡颗粒细胞分泌孕酮和雌二醇.