本研究论文的第一部分是斑马鱼的DNA聚合酶Delta(Polymerase Delta,polδ)四个亚基(Pold1,Pold2,Pold3,Pold4)基因的重组质粒构建和真核表达以及斑马鱼PCNA基因的克隆、原核表达及其互作蛋白的鉴定等方面的初步探索。经典模式生物斑马鱼体内87%的基因与人源基因相似,这意味着斑马鱼不仅可以用于研究鱼类病原体感染途径及致病机理,也可用于探究人类疾病的致病机理。真核细胞DNA polδ是染色体DNA复制中主要的复制酶,也参与多种形式的DNA损伤修复过程。而细胞增殖抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)作为引导DNA polδ至复制叉上发挥作用的重要辅助因子,在DNA复制和DNA损伤修复等细胞活动中发挥重要的作用。近年来,polδ的大规模分离纯化技术已经有很大的进步,其具体生理生化功能也有大量的研究报道,但斑马鱼DNA polδ的研究报道甚少。本研究将斑马鱼DNA polδ的一个或多个亚基基因与杆状病毒转移载体pFBDM进行质粒构建,获得不同亚基基因组合的重组质粒。利用新型的MultiBac杆状病毒表达系统制备了含有斑马鱼DNA polδ不同亚基组合的重组病毒。同时尝试利用真核系统制备重组polδ酶蛋白复合物。Western Blot分析表明,斑马鱼DNA polδ各亚基在Sf-9细胞中均能成功表达;质谱分析结果进一步证实各重组蛋白分别由Pold1、Pold2、Pold4所编码。本研究还对斑马鱼PCNA基因进行了克隆和重组质粒的构建,并通过原核表达系统表达纯化了重组PCNA蛋白。利用CNBr-activated SepharoseTM 4B制备重组PCNA蛋白亲和层析柱,结合亲和层析及质谱技术筛选鉴定斑马鱼PCNA的互作蛋白。质谱鉴定结果显示PCNA互作蛋白主要参与DNA复制、损伤修复、细胞周期调控等细胞生理活动。本部分的研究为深入研究polδ在机体繁殖和胚胎发育的功能奠定了基础,为后续开发斑马鱼polδ缺陷型相关疾病模型提供依据。本论文的第二部分进行了赤点石斑鱼NF-κB因子抑制蛋白IκBα基因的分子克隆与功能分析。水产养殖环境的恶化给我国鱼类养殖业带来了巨大的损失。石斑鱼是重要的养殖经济鱼类,研究其自身免疫相关基因及其作用机制,有利于提高石斑鱼的免疫力及抗病力而达到健康养殖的目的。NF-κB信号转导通路作为联系天然免疫系统和特异性免疫系统的纽带,参与机体免疫和发育的多种生理活动。本研究通过5’-和3’-RACE技术克隆并鉴定了一个编码赤点石斑鱼NF-κB因子抑制蛋白IκBα基因(命名为EaIκBα)。为进一步分析其表达模式及抗病毒能力,本研究对EaIκBα基因进行原核表达并检测其在石斑鱼各组织的表达情况。研究结果显示,EaIκBα基因在免疫组织血细胞、头肾以及肝脏中都有较高的表达。经LPS、溶藻弧菌和石斑鱼虹彩病毒SGIV刺激石斑鱼后,对EaIκBα在头肾中的表达情况进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析,结果显示其表达量都有不同程度的升高,表明EaIκBα在细菌和病毒的感染中发挥了相对重要的作用。另外,研究结果显示,过表达的EaIκBα能抑制SGIV感染的致细胞病变效应(CPE)进程,降低病毒主要衣壳蛋白MCP和核心蛋白ORF162的表达。综上研究结果表明,EaIκBα在宿主抵御细菌和病毒感染的免疫反应中发挥了重要的作用,为进一步探索石斑鱼免疫机制提供新的理论依据。