【摘 要】
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背景：研究证实超极化激活环化核苷酸门控通道HCN (hyperpolarization-activated, cyclic nucleotide-gated)电流在调控心脏的自发搏动中起着非常重要的作用。目的：观察HCN2基因
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背景：研究证实超极化激活环化核苷酸门控通道HCN (hyperpolarization-activated, cyclic nucleotide-gated)电流在调控心脏的自发搏动中起着非常重要的作用。目的：观察HCN2基因重组质粒转染后的293t细胞中目的基因在核酸和蛋白质水平的表达。方法：1、以脂质体转染试剂Lipofectamine 2000将含全长hHCN2基因的质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293t细胞中。2、通过逆转录PCR和实时荧光定量PCR分别定性定量地检测hHCN2在核酸水平上的表达。3、通过Western-blot定性地检测hHCN2在蛋白水平的表达。结果：1、用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000成功地将质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP转染至293t细胞中。2、逆转录PCR定性地检测到在100bp-250bp处可见高度特异DNA的条带,与携带HCN2基因的质粒扩增出的片段位置相同。实时荧光定量PCR定量地检测到实验组与对照组之间比较统计学差异非常显著(P=0.006),且实验组的hHCN2 mRNA的表达量较对照组高,实验组hHCN2 mRNA的表达量是对照组的2倍多,但不到4倍。3、Western-blot定性地检测hHCN2蛋白水平的表达,与HCN2蛋白的分布相符合。且转染组的表达水平明显高于未作处理组及对照组。结论：质粒CMV-hHCN2-3xHA-IRES-EGFP成功转染后的293t细胞中hHCN2基因可以在核酸和蛋白水平表达。
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