普鲁兰酶(pullulanase，EC3.2.1.41)是一种专一性分解普鲁兰糖、支链淀粉和相应的低聚糖中的α-1，6-糖苷键的解支酶。当它与其它淀粉酶并用时，可以最大限度地利用淀粉，提高原料的利用效率。因此，它被广泛应用于淀粉加工、食品、纺织、洗涤剂等行业中。　　 本研究从淀粉加工厂附近土壤中分离出一株具有产普鲁兰酶能力的优良菌株GXBC-2。通过对其生理生化特征和16SrDNA序列分析，初步鉴定该菌株为BacilluscereusGXBC-2。通过同源普鲁兰酶基因序列比对，利用PCR技术从BacilluscereusGXBC-2中分别扩增出普鲁兰酶基因APLL-A(amylopullulanase-A)和PLL-B(pullulanase-B)，并在大肠杆菌E.coliBL21中成功进行高效表达。　　 经过镍柱将重组酶APLL-A分离纯化后，SDS-PAGE电泳检测在81kD处有特异性蛋白表达条带。利用DNS法对重组酶APLL-A的性质进行测定。重组酶APLL-A的普鲁兰酶和淀粉酶活性的最适温度分别为45℃和40℃，最适pH都是6.5，Km值分别为0.84mg/mL，比活力分别为136.4U/mg和43.9U/mg，金属离子Cu2+、Zn2+和Fe2+对APLL-A的普鲁兰酶和淀粉酶活力都具有显著抑制作用，Na+、Ni2+及EDTA对其两种酶活力都具有微弱的抑制作用，Mg2+、Mn2+则对其两种酶活力具有微弱的激活作用。HPLC分析结果表明重组酶APLL-A可水解普鲁兰糖产生麦芽三糖，水解淀粉产生葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖的混合物。所以，重组酶APLL-A为Ⅱ型普鲁兰酶。　　 重组酶PLL-B经过镍柱分离纯化后，SDS-PAGE电泳检测在97kD处有特异性蛋白表达条带。利用DNS法对重组酶PLL-B的性质进行测定。其最适温度为50℃，最适pH为6.5-7.0，Km为0.85mg/mL，比活力为251.3U/mg，金属离子Cu2+、Zn2+和Fe3+对PLL-B酶活力具有显著抑制作用，Ba2+、Ni2+、SDS、EDTA对酶活力都具有微弱的抑制作用，而Mg2+、Ca2+、Mn2+等金属离子对PLL-B酶的普鲁兰酶活力有很明显的激活作用，K+则对酶活力具有微弱的激活作用。HPLC分析表明重组酶PLL-B可水解普鲁兰糖产生麦芽三糖，不能水解淀粉。所以，重组酶PLL-B为Ⅰ型普鲁兰酶。