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目的:初步分析白血病患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC)中T淋巴细胞受体(Tcell receptor,TCR)a链、β链各家族互补决定区3(complementarity determining regions3,CDR3)谱系特征和克隆增殖性(溶解曲线单峰)家族的分子特征。
方法:(1)采集4例健康志愿者和15例白血病患者外周血,分离PBMC;(2)提取PBMC中总RNA,并以总RNA为模板合成cDNA;(3)分别以人34个TCR a链和26个TCRβ链胚系可变区基因家族-TRAV(TCRa chain variable gene,TRAV)和TRBV(TCRβ chain variable gene,TRBV)设计上游引物,以共同的TCR a链和TCRβ链胚系恒定区基因家族-TRAC(TCR a chainconstant gene,TRAC)和TRBC(TCRβ chain constant gene,TRBC)设计下游引物;用荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)扩增TCR a链34个家族和β链26个家族的CDR3区;(4)用FQ-PCR溶解曲线法分析TCR a链、β链各家族CDR3区的单/寡/多克隆性增殖情况;各家族FQ-PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳作初步分析;(5)挑选单/寡克隆增殖性(溶解曲线单峰)家族进行普通PCR;PCR产物回收后测序,分析基因序列、氨基酸序列。
结果:(1)4例健康志愿者34个TRAV家族和26个TRBV家族CDR3区FQ-PCR溶解曲图,各家族均显示为多个峰型图;各家族FQ-PCR产物1.5%琼脂糖凝胶电泳,均于预测大小位置显示条带;(2)白血病患者TCR34个TRAV家族和26个TRBV家族CDR3区的FQ-PCR溶解曲线图,多数家族显示为多峰图,部分家族显示单峰图,部分家族显示低峰/无峰图;各家族FQ-PCR产物1.5%琼脂糖凝胶电泳,各家族在预测大小位置显示条带;白血病患者TRAV和TRBV家族CDR3区FQ-PCR溶解曲线图单峰家族基因序列、氨基酸序列不同。
结论:白血病患者外周血中TRAV和TRBV家族CDR3区FQ-PCR溶解曲线图,存在数量不等的异常峰型(表现为单峰、寡峰、低/无峰);白血病患者外周血TRAV和TRBV家族存在克隆性增殖;各增殖家族的基因序列、氨基酸序列不同;是进一步研究白血病外周血中T淋巴细胞肿瘤性质和T淋巴细胞肿瘤抗肿瘤机制的基础。